| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-36页 |
| 0 引言 | 第14页 |
| 1 虾夷扇贝新品种“海大金贝”的成功培育及其特性 | 第14-20页 |
| ·“海大金贝”的培育历程 | 第14-15页 |
| ·“海大金贝”主要色素的分离鉴定 | 第15-17页 |
| ·类胡萝卜素的生物学功能 | 第17-18页 |
| ·“海大金贝”与普通虾夷扇贝类胡萝卜素累积情况比较 | 第18-19页 |
| ·“海大金贝”的优良性状 | 第19-20页 |
| 2 影响虾夷扇贝存活率的因素 | 第20-25页 |
| ·外界环境 | 第20-22页 |
| ·温度 | 第20-21页 |
| ·重金属 | 第21页 |
| ·溶解氧 | 第21-22页 |
| ·盐度和 PH | 第22页 |
| ·病害生物 | 第22-24页 |
| ·细菌 | 第22-23页 |
| ·病毒 | 第23-24页 |
| ·原生动物 | 第24页 |
| ·敌害生物 | 第24页 |
| ·自身因素 | 第24-25页 |
| 3 差异基因筛查方法 | 第25-28页 |
| ·mRNA 水平上的筛查 | 第25-27页 |
| ·抑制性消减杂交 | 第25-26页 |
| ·基因表达连续性分析 | 第26-27页 |
| ·RNA-seq | 第27页 |
| ·蛋白质水平上的筛查 | 第27-28页 |
| ·双向电泳技术 | 第27-28页 |
| ·iTRAQ | 第28页 |
| 4 铁蛋白概述 | 第28-36页 |
| ·铁离子的重要性 | 第28-31页 |
| ·生命活动中的双刃剑—铁 | 第28-29页 |
| ·铁与先天免疫系统 | 第29-31页 |
| ·铁蛋白 | 第31-36页 |
| ·铁蛋白的结构及类型 | 第31-32页 |
| ·铁蛋白的细胞位置 | 第32页 |
| ·铁蛋白的表达调控 | 第32-34页 |
| ·铁蛋白与先天免疫系统 | 第34-36页 |
| 第二章 “海大金贝”和普通虾夷扇贝蛋白组学初步比较分析 | 第36-47页 |
| 0 引言 | 第36-37页 |
| 1 材料与方法 | 第37-41页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·样品准备 | 第37页 |
| ·双向电泳 | 第37-38页 |
| ·电泳图像分析 | 第38-39页 |
| ·ESI QqTOF 质谱测定 | 第39页 |
| ·质谱解析 | 第39页 |
| ·基因表达量分析 | 第39-41页 |
| 2 实验结果 | 第41-43页 |
| ·“海大金贝”与普通虾夷扇贝♂性腺双向电泳结果 | 第41-43页 |
| ·荧光定量 PCR 结果 | 第43页 |
| 3 讨论 | 第43-47页 |
| 第三章 六种虾夷扇贝铁蛋白亚基的克隆、鉴定及特征分析 | 第47-92页 |
| 0 引言 | 第47-48页 |
| 第一节 虾夷扇贝铁蛋白克隆及生物信息学特征分析 | 第48-61页 |
| 1 材料与方法 | 第48-51页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·肝胰腺总 RNA 提取 | 第48页 |
| ·虾夷扇贝铁蛋白 cDNA 全长序列的获得 | 第48-50页 |
| ·虾夷扇贝铁蛋白 DNA 序列 | 第50页 |
| ·生物信息学分析铁蛋白序列特征 | 第50-51页 |
| 2 实验结果 | 第51-58页 |
| ·虾夷扇贝铁蛋白 DNA 序列特征 | 第51-53页 |
| ·虾夷扇贝铁蛋白 cDNA 及编码氨基酸特征 | 第53-55页 |
| ·虾夷扇贝铁蛋白功能位点和高级结构分析 | 第55-56页 |
| ·虾夷扇贝铁蛋白理化性质预测结果 | 第56-57页 |
| ·虾夷扇贝铁蛋白同源性及系统发生分析 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-61页 |
| 第二节 虾夷扇贝铁蛋白表达分析 | 第61-69页 |
| 1 材料与方法 | 第61-62页 |
| ·实验材料 | 第61页 |
| ·RNA 提取 | 第61页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第61页 |
| ·虾夷扇贝铁蛋白基因表达分析 | 第61-62页 |
| 2 实验结果 | 第62-66页 |
| ·虾夷扇贝幼虫期铁蛋白表达分析 | 第62-63页 |
| ·成体虾夷扇贝各组织铁蛋白表达分析 | 第63-65页 |
| ·虾夷扇贝受胁迫后肝胰腺内铁蛋白表达分析 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-69页 |
| 第三节 重组铁蛋白特征分析及虾夷扇贝铁蛋白细胞定位 | 第69-84页 |
| 1 材料与方法 | 第69-77页 |
| ·实验材料 | 第69页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第69页 |
| ·虾夷扇贝肝胰腺 RNA 提取 | 第69页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第69-70页 |
| ·虾夷扇贝铁蛋白原核表达载体 pET28a-PyFer 的构建 | 第70-71页 |
| ·重组铁蛋白在大肠杆菌内的诱导表达条件优化 | 第71-72页 |
| ·重组铁蛋白纯化 | 第72-73页 |
| ·用 Ni~(2+)-NTA 柱对含有重组铁蛋白菌体的上清液进行纯化 | 第72-73页 |
| ·用 Ni~(2+)-NTA 柱对重组铁蛋白包涵体进行纯化 | 第73页 |
| ·虾夷扇贝重组铁蛋白活性分析 | 第73-74页 |
| ·铁氧化酶活性分析 | 第73-74页 |
| ·抑菌活性分析 | 第74页 |
| ·虾夷扇贝铁蛋白细胞定位 | 第74-77页 |
| ·虾夷扇贝铁蛋白多克隆抗体制备 | 第74页 |
| ·Western blot 分析 | 第74-75页 |
| ·虾夷扇贝组织石蜡切片制备 | 第75-76页 |
| ·虾夷扇贝铁蛋白组织定位 | 第76-77页 |
| 2 结果 | 第77-80页 |
| ·四种虾夷扇贝重组铁蛋白性质 | 第77页 |
| ·重组铁蛋白诱导表达条件优化 | 第77页 |
| ·可溶性重组铁蛋白的纯化及活性分析 | 第77-79页 |
| ·包涵体内重组铁蛋白纯化及 western blot 分析 | 第79-80页 |
| ·铁蛋白在虾夷扇贝组织中的定位 | 第80页 |
| 3 讨论 | 第80-84页 |
| 第四章 候选基因表达情况与虾夷扇贝抗逆性的关系 | 第84-92页 |
| 0 引言 | 第84页 |
| 1 材料与方法 | 第84-86页 |
| ·实验材料 | 第84-85页 |
| ·RNA 提取 | 第85页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第85页 |
| ·两品种虾夷扇贝内 6 种铁蛋白基因表达差异分析 | 第85-86页 |
| 2 实验结果 | 第86-90页 |
| ·“海大金贝”和普通虾夷扇贝各组织间 6 种铁蛋白表达差异分析 | 第86-87页 |
| ·受铁离子胁迫后，两种虾夷扇贝肝胰腺内 6 种铁蛋白表达变化趋势分析 | 第87-89页 |
| ·受鳗弧菌胁迫后，两种虾夷扇贝肝胰腺内 6 种铁蛋白表达变化趋势分析 | 第89-90页 |
| 3 讨论 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-108页 |
| 附录 | 第108-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 个人简历 | 第122页 |
| 发表的学术论文 | 第122页 |
| 已申请的国家专利 | 第122-123页 |
