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谷子DREB类转录因子SiARDP功能及其表达调控研究

摘要第1-5页
Abstract第5-6页
目录第6-9页
縮略词第9-10页
第一章 文献综述第10-28页
   ·植物对干旱胁迫的感知及响应第10-13页
     ·干旱胁迫对植物的影响第10-11页
     ·植物对干旱胁迫的响应第11-13页
   ·干旱胁迫下植物的信号转导途径第13-20页
     ·植物对干旱胁迫的感知第13-14页
     ·干旱胁迫信号的转导第14-20页
       ·钙离子在干旱胁迫信号中的作用第15页
       ·蛋白激酶信号途径第15-16页
       ·其它信号途径第16-17页
       ·植物激素参与干旱胁迫信号转导第17-18页
       ·干旱胁迫下基因的转录调控第18-19页
       ·干旱胁迫信号转导中的转录后调节第19-20页
       ·干旱胁迫信号转导中的翻译后调节第20页
   ·植物中与干旱胁迫相关的转录因子第20-24页
     ·植物中与逆境胁迫相关的DREB类转录因子的研究第21-24页
     ·植物中与逆境胁迫相关的AREB类转录因子的研究第24页
   ·谷子的研究进展第24-26页
     ·谷子的重要地位和特色第24-25页
     ·谷子的研究进展第25-26页
   ·本论文研究的目的和意义第26-28页
第二章 材料与方法第28-52页
   ·实验材料第28-32页
     ·宿主菌第28页
     ·主要载体第28页
     ·植物材料第28页
     ·各种酶及试剂第28-29页
     ·主要仪器设备第29页
     ·实验所用引物第29-30页
     ·常用培养基配制第30-31页
     ·常用溶液的配制第31-32页
   ·实验所需溶液配制第32-36页
     ·质粒DNA的提取第32页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第32页
     ·农杆菌感受态细胞的制备第32页
     ·农杆菌介导的遗传转化第32页
     ·植物基因组DNA提取缓冲液第32-33页
     ·Northern杂交第33页
     ·Western杂交第33页
     ·His融合蛋白表达纯化第33页
     ·GST融合蛋白表达纯化第33-34页
     ·SDS-PAGE第34页
     ·凝胶阻滞第34-35页
     ·植物蛋白提取第35页
     ·体外磷酸化第35页
     ·谷子原生质体转化第35页
     ·酵母单杂第35-36页
   ·实验方法第36-52页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第36页
     ·农杆菌感受态细胞的制备第36页
     ·质粒或连接产物对大肠杆菌及农杆菌的转化第36页
     ·质粒DNA的提取第36-37页
     ·小量提取植物基因组DNA第37页
     ·植物基因组DNA的PCR扩增第37-38页
     ·植物组织总RNA的提取第38页
     ·RNA反转录、RT-PCR及Real-time PCR体系第38-39页
     ·Northern杂交第39-40页
     ·点突变实验第40-41页
     ·融合蛋白的原核诱导表达及纯化第41-42页
       ·融合蛋白诱导表达第41页
       ·His-tag融合蛋白的纯化第41页
       ·GST融合蛋白的纯化第41-42页
     ·Western blot检测第42页
     ·凝胶阻滞实验第42-44页
     ·植物组织蛋白提取第44页
     ·体外磷酸化实验第44页
     ·植物培养第44页
     ·农杆菌转化拟南芥第44页
     ·拟南芥阳性植株筛选第44-45页
     ·拟南芥及谷子的抗旱抗盐检测第45页
     ·电导率测定第45页
     ·植物体内游离脯氨酸测定第45-46页
     ·农杆菌转化谷子愈伤组织第46-47页
     ·谷子原生质体的分离和转化第47页
     ·染色质免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation assay,ChIP)第47-48页
     ·酵母转录激活实验第48-49页
     ·酵母单杂交实验第49-52页
       ·诱饵酵母转化及抗生素浓度检测第49页
       ·酵母单杂实验谷子cDNA文库构建及转化第49-52页
第三章 结果与分析第52-89页
   ·谷子SiARDP的克隆第52-56页
     ·构建诱饵质粒和酵母诱饵菌株第52-53页
     ·酵母单杂筛选谷子cDNA文库第53-54页
     ·酵母单杂验证Si138结合DRE元件第54页
     ·凝胶阻滞实验验证Si138结合DRE元件第54-56页
   ·Si138的生物信息学分析第56-59页
   ·谷子Si138逆境胁迫下表达模式及表达部位分析第59-60页
   ·SiARDP转录因子性质分析第60-61页
     ·SiARDP的亚细胞定位第60-61页
     ·SiARDP的转录活性分析第61页
   ·SiARDP增强转基因拟南芥对干旱和盐胁迫的耐受力第61-67页
     ·SiARDP异源表达拟南芥植株的获得第61-62页
     ·SiARDP异源表达拟南芥植株的抗旱及抗盐性分析第62-67页
   ·SiARDP增强超表达谷子对干旱胁迫的耐受力第67-72页
     ·SiARDP超表达谷子的获得第67-68页
     ·SiARDP超表达谷子的检测第68-69页
     ·SiARDP超表达谷子的抗旱性分析第69-70页
     ·SiARDP下游靶基因分析第70-72页
   ·谷子AREB类转录因子结合SiARDP启动子区第72-79页
     ·SiARDP启动子区分析第72-73页
     ·谷子SiAREB1和SiAREB2的克隆和非生物胁迫下表达模式分析第73-74页
     ·谷子SiAREB1和SiAREB2体外结合SiARDP启动子区第74-77页
     ·谷子SiAREB1和SiAREB2体内结合SiARDP启动子第77-79页
   ·SiAREB1和SiAREB2转录因子性质分析第79-80页
     ·SiAREB1和SiAREB2的亚细胞定位第79-80页
     ·SiAREB1和SiAREB2的转录活性分析第80页
   ·SiAREB1和SiAREB2参与植物对干旱和盐胁迫的响应第80-89页
     ·SiAREB1和SiAREB2转基因拟南芥植株的获得第81-82页
     ·SiAREB1和SiAREB2异源表达植株抗旱性和抗盐性分析第82-86页
     ·SiAREB1和SiAREB2点突变和体外磷酸化分析第86-89页
第四章 讨论第89-94页
   ·SiARDP超表达增强转基因植株抵抗干旱胁迫和盐胁迫的能力第89-90页
   ·SiAREB1和SiAREB2调控SiARDP并且参与植物逆境胁迫第90-91页
   ·SiARDP参与到依赖ABA的逆境信号转导途径第91-92页
   ·SiAREB2对SiARDP的调控可能受磷酸化修饰调节第92-93页
   ·进一步研究设想第93-94页
第五章 结论第94-96页
第六章 参考文献第96-112页
致谢第112-114页
个人简历第114页

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