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陆地棉Cyt b5基因的克隆及其表达分析

缩略词表第1-5页
摘要第5-7页
Abstract第7-9页
第一章 文献综述第9-18页
   ·引言第9页
   ·植物抗逆机制研究进展第9-13页
     ·逆境胁迫对植物的危害第9-12页
     ·植物抗逆性研究的应用及其进展第12-13页
   ·棉花抗逆机制研究进展第13-14页
   ·细胞色素 b5 蛋白的研究进展第14-17页
     ·细胞色素 b5 蛋白的结构特征第14-15页
     ·细胞色素 b5 蛋白的光谱吸收特性第15页
     ·细胞色素 b5 蛋白的还原机制第15-16页
     ·细胞色素 b5 蛋白在动物细胞中的功能第16页
     ·细胞色素 b5 蛋白在植物中的功能及研究现状第16-17页
   ·本研究的目的和意义第17-18页
第二章 材料与方法第18-43页
   ·材料第18-23页
     ·菌株和载体第18页
     ·植物材料第18页
     ·酶及试剂盒第18页
     ·培养基第18-20页
     ·常用溶液配方及各种抗生素与激素的配置第20-21页
       ·常用溶液配方第20-21页
       ·常用抗生素与激素的配置第21页
     ·蛋白质电泳胶配制第21-22页
     ·蛋白质纯化相关溶液第22-23页
   ·方法第23-43页
     ·GhCyt b5 基因的克隆第23-32页
       ·棉花幼苗的培养第23页
       ·棉花根、茎、叶中总 RNA 的提取第23-24页
       ·陆地棉 GhCyt b5 基因的克隆第24-32页
     ·植物表达载体的构建第32-35页
       ·带有酶切位点的 GhCyt b5 基因的扩增第32-33页
       ·PCR 产物回收与纯化第33页
       ·酶切获得目标片段第33-34页
       ·目的基因和表达载体的连接第34页
       ·转化感受态大肠杆菌第34页
       ·pBin438- GhCyt b5 质粒的抽提及酶切鉴定第34-35页
       ·农杆菌的电击转化第35页
     ·过量表达陆地棉 GhCyt b5 烟草植株的获得第35-36页
       ·烟草无菌苗的培养第35-36页
       ·根癌农杆菌介导的烟草遗传转化第36页
     ·转基因烟草植株筛选第36-38页
       ·转基因烟草苗及野生型烟草基因组 DNA 的提取第36-37页
       ·转基因烟草植株 DNA 的检测第37页
       ·转基因烟草植株及野生型烟草植株 RNA 的提取第37-38页
     ·转基因烟草植株抗旱性检测第38页
     ·原核表达载体 pET32a-GhCyt b5 的构建及其蛋白表达纯化第38-41页
       ·原核表达载体 pET32a-GhCyt b5 的构建第38-40页
       ·GhCyt b5 蛋白的诱导表达第40-41页
     ·GhCyt b5 蛋白的电子传递功能分析第41-43页
第三章 结果与分析第43-55页
   ·GhCyt b5 基因 cDNA 全长的克隆及分析第43-46页
     ·棉花根、茎、叶总 RNA 的提取第43页
     ·棉花 Cyt b5 基因 cDNA 全长的克隆及序列分析第43-44页
     ·GhCyt b5 基因的进化分析第44-46页
   ·真核表达载体 pBin438- GhCyt b5 的构建第46-47页
     ·带有酶切位点的 GhCyt b5 基因的扩增及序列分析第46-47页
     ·真核表达载体的构建及分析第47页
   ·烟草的遗传转化结果第47-51页
     ·工程菌制备及检测第47-48页
     ·转基因烟草植株的获得第48-49页
     ·转基因烟草 DNA 的检测第49-50页
     ·转基因烟草植株 RNA 的检测第50-51页
     ·转基因烟草苗抗旱性功能分析第51页
   ·原核表达载体的构建及其蛋白的诱导表达第51-53页
     ·原核表达载体 pET32a-GhCyt b5 的构建第51-52页
     ·GhCyt b5 重组蛋白表达及其条件优化第52-53页
   ·GhCyt b5 蛋白的电子传递功能分析第53-55页
第四章 讨论第55-60页
   ·关于基因克隆的问题第55-56页
     ·RNA 的提取第55页
     ·RACE 法克隆第55-56页
     ·关于 PCR 扩增第56页
   ·关于原核表达的问题第56-57页
   ·关于真核表达的问题第57-58页
     ·转基因植物表达体系的构建第57-58页
     ·烟草转化第58页
   ·GhCyt b5 基因功能分析及后期的实验设想第58-60页
参考文献第60-65页
致谢第65-66页
作者介绍第66-67页
导师简介第67-69页

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