| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-33页 |
| ·牛奶中抗生素残留的原因 | 第17-18页 |
| ·牛奶中抗生素残留的危害 | 第18页 |
| ·牛奶中抗生素残留的现状 | 第18-20页 |
| ·牛奶中抗生素残留的检测方法 | 第20-24页 |
| ·理化检测法 | 第20-21页 |
| ·微生物学检测方法 | 第21-22页 |
| ·免疫分析法 | 第22-24页 |
| ·肺炎链球菌中的 PBPS | 第24-26页 |
| ·PBP3 的功能 | 第26-27页 |
| ·PBP3 的结构 | 第27-31页 |
| ·PBP3 的总体结构 | 第27-28页 |
| ·PBP3 的活性位点及氢键网络 | 第28-30页 |
| ·PBP3 的Ω环 | 第30-31页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| ·研究的技术路线 | 第32-33页 |
| 第二章 表达质粒 PGEX-6P-PBP3*的构建及鉴定 | 第33-44页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要设备 | 第34-35页 |
| ·表达载体构建方法 | 第35-39页 |
| ·提取肺炎链球菌 R6 的基因组 DNA | 第35页 |
| ·构建 pMD18-T-pbp3* (简写 p3T)克隆载体 | 第35-38页 |
| ·构建 pGEX-6p-pbp3*表达载体 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-41页 |
| ·肺炎链球菌 R6 基因组的提取 | 第39页 |
| ·从基因组中扩增 pbp3*基因 | 第39-40页 |
| ·菌液 PCR 初步检测 p3T 的连接情况 | 第40页 |
| ·目的片段与载体的双酶切 | 第40-41页 |
| ·菌液 PCR 初步鉴定 pGEX-6p-pbp3*表达质粒的构建 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 第三章 青霉素结合蛋白 PBP3*的表达、纯化及活性鉴定 | 第44-59页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·主要设备 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-51页 |
| ·预表达实验, 优化条件, 确定目的蛋白表达位置。然后扩大培养 | 第45-46页 |
| ·检测 GST 标签蛋白的酶活 | 第46页 |
| ·PBP3*的纯化 | 第46-50页 |
| ·PBP3*蛋白等电点的测定 | 第50页 |
| ·利用头孢喹诺结合实验检测 PBP3*的活性 | 第50-51页 |
| ·结果 | 第51-54页 |
| ·GST-PBP3*融合蛋白的预表达 | 第51页 |
| ·GST 标签蛋白的酶活检测 | 第51-52页 |
| ·GST-PBP3*融合蛋白的亲和纯化 | 第52页 |
| ·PBP3*蛋白的纯化 | 第52-53页 |
| ·等电点测定结果 | 第53页 |
| ·利用 PBP3*结合头孢喹诺实验来检测纯化后 PBP3*的活性 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-58页 |
| ·蛋白的表达纯化 | 第54-55页 |
| ·PBP3 与配体反应的动力学参数 | 第55-56页 |
| ·PBP3*活性鉴定的方法讨论 | 第56-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 第四章 PBP3*受体-Β-内酰胺类抗生素-酶检测试剂盒的初步构建 | 第59-72页 |
| ·实验材料 | 第59-60页 |
| ·主要试剂 | 第59-60页 |
| ·溶液的配制 | 第60页 |
| ·主要设备 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-62页 |
| ·受体的包被和封闭(制板) | 第60-61页 |
| ·受体对不同 -内酰胺类抗生素特异性竞争实验 | 第61页 |
| ·基于受体的 -内酰胺类抗生素多残留检测方法在牛奶检测中的应用 | 第61-62页 |
| ·结果与分析 | 第62-69页 |
| ·受体-酶多残留检测技术的初步研究 | 第62-64页 |
| ·竞争曲线的建立 | 第64-65页 |
| ·特异性分析 | 第65-66页 |
| ·检测限和定量限的确定 | 第66-67页 |
| ·精密度测定 | 第67页 |
| ·受体-酶多残留检测技术的牛奶样品添加回收 | 第67页 |
| ·PBP3*与 PBP2x 受体蛋白的比较 | 第67-68页 |
| ·实际样品检测结果及与 Randox ELISA 试剂盒的比较 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| ·以受体为检测试剂的快速筛选方法研究 | 第69-70页 |
| ·以受体-酶为基础的 -内酰胺类抗生素快速检测试剂盒的构建 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 第五章 全文结论 | 第72-74页 |
| ·本研究的结论 | 第72-73页 |
| ·创新点 | 第73页 |
| ·进步的研究设想 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 作者简历 | 第82-83页 |
