| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 英文缩略词表 | 第7-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-17页 |
| 1 重金属铅的雄性生殖毒理学研究现状 | 第10-11页 |
| ·重金属铅的理化性质 | 第10页 |
| ·重金属铅对环境的污染 | 第10页 |
| ·重金属铅的毒性研究进展 | 第10页 |
| ·重金属铅的雄性生殖毒性的研究进展 | 第10-11页 |
| 2 重金属铅对睾丸间质细胞（LC）毒性作用机制的研究 | 第11-14页 |
| ·睾丸间质细胞及其功能 | 第11-12页 |
| ·雄激素合成通路 cAMP-PKA/PKC-ERK1/2 的研究 | 第12-13页 |
| ·重金属铅对睾酮合成的影响 | 第13-14页 |
| 3 重金属对 Leydig 细胞的毒性作用与线粒体功能密切相关 | 第14-15页 |
| 4 论文背景思路 | 第15-16页 |
| 5 技术路线 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-30页 |
| 1 仪器与材料 | 第17-20页 |
| ·仪器 | 第17页 |
| ·材料与试剂 | 第17-19页 |
| ·试剂溶液配制（所有溶液配置用水均为超纯水） | 第19-20页 |
| 2 方法 | 第20-30页 |
| ·放射性免疫法测定重金属铅对睾丸间质细胞合成孕酮功能的影响 | 第20-21页 |
| ·线粒体膜电位的检测 | 第21-22页 |
| ·透射电镜观察线粒体形态学损伤 | 第22-23页 |
| ·ELISA 检测 cAMP 水平变化 | 第23-24页 |
| ·Real timePCR 从基因水平验证线粒体内孕酮生成通路上的基因表达水平的变化 | 第24-27页 |
| ·Western Blot 验证通路上各种蛋白表达水平的变化 | 第27-29页 |
| ·免疫荧光检测 MEK1/2，ERK1/2 与线粒体的共定位 | 第29页 |
| ·统计学分析 | 第29-30页 |
| 第三章 结果与分析 | 第30-43页 |
| 1 重金属铅对睾丸间质细胞分泌孕酮的影响 | 第30页 |
| 2 Real time RT-PCR 检测铅对睾丸间质细胞合成孕酮关键酶的基因表达水平的影响 | 第30-31页 |
| 3 蛋白水平检测重金属铅对睾丸间质细胞合成孕酮关键酶表达的影响 | 第31-34页 |
| 4 重金属铅对线粒体膜电位的损伤作用 | 第34-35页 |
| 5 铅对线粒体形态学损伤 | 第35-36页 |
| 6 铅对雄激素合成通路 cAMP-PKA/PKC-ERK1/2 的影响 | 第36-41页 |
| ·cAMP 水平的检测 | 第37页 |
| ·Western Blots 检测 PKA、PKC、MEK1/2、ERK1/2 蛋白表达和 MEK1/2、ERK1/2 蛋白磷酸化水平 | 第37-41页 |
| 7 免疫荧光检测 MEK1/2、ERK1/2 与线粒体的共定位 | 第41-43页 |
| 第四章 讨论 | 第43-47页 |
| 1 铅抑制类固醇激素合成酶的表达 | 第43页 |
| 2 线粒体是重金属铅损伤 LC 的重要靶细胞器 | 第43-44页 |
| 3 信号通路 cAMP-PKA/PKC-ERK1/2 参与调节线粒体功能和类固醇激素的分泌 | 第44-47页 |
| ·环磷酸腺苷（cAMP） | 第44-45页 |
| ·蛋白激酶 A(PKA)与蛋白激酶 C（PKC） | 第45页 |
| ·细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK) | 第45-47页 |
| 第五章 结论 | 第47-48页 |
| 后续展望 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 附录 | 第55-57页 |
| 1 线粒体的提取及验证 | 第55-57页 |
| ·Mt 分离 | 第55页 |
| ·纯度鉴定 | 第55页 |
| ·Mt 蛋白提取 | 第55页 |
| ·Mt 分离及鉴定 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
