| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-27页 |
| 1 鱼类天然免疫和其模式识别受体 | 第11-13页 |
| ·鱼类天然免疫 | 第11页 |
| ·模式识别受体 | 第11-12页 |
| ·Toll样受体(TLRs) | 第12-13页 |
| 2 髓样分化因子(MyD88) | 第13-17页 |
| ·MyD88基因的发现 | 第13-14页 |
| ·MyD88的结构 | 第14-15页 |
| ·MyD88的组织分布和表达 | 第15页 |
| ·MyD88介导的TLRs信号通路 | 第15-16页 |
| ·MyD88的生物学功能 | 第16-17页 |
| ·信号传导通路中的接头蛋白 | 第16-17页 |
| ·与自身免疫性疾病发生相关 | 第17页 |
| ·与厌食综合症相关 | 第17页 |
| 3 检测MyD88基因表达研究 | 第17-23页 |
| ·检测基因表达的主要方法 | 第17-19页 |
| ·翻译水平检测方法 | 第17-18页 |
| ·转录水平检测 | 第18-19页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第19-22页 |
| ·实时定量PCR的原理 | 第19页 |
| ·荧光定量PCR的理论依据 | 第19-20页 |
| ·荧光定量PCR标记方法及其特点 | 第20页 |
| ·实时定量PCR的类型 | 第20-21页 |
| ·相对定量PCR方法 | 第21页 |
| ·荧光定量PCR实验操作流程 | 第21-22页 |
| ·MyD88基因的表达分析 | 第22-23页 |
| 4 罗非鱼介绍 | 第23-24页 |
| 5 本研究的目的与技术路线 | 第24-27页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第24页 |
| ·本研究的技术路线 | 第24-27页 |
| 第二章 罗非鱼MyD88基因的克隆及序列分析 | 第27-51页 |
| 1 实验材料 | 第27-28页 |
| ·实验鱼 | 第27页 |
| ·实验试剂 | 第27-28页 |
| ·RNA提取相关试剂 | 第27页 |
| ·RT-PCR相关试剂 | 第27-28页 |
| ·目的片段回收相关试剂 | 第28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳相关试剂 | 第28页 |
| ·DNA Marker | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·实验仪器 | 第28页 |
| 2 实验方法 | 第28-40页 |
| ·RNA提取 | 第29页 |
| ·实验准备 | 第29页 |
| ·罗非鱼肝脏RNA的提取-Trizol法 | 第29页 |
| ·罗非鱼肝脏cDNA的制备与鉴定 | 第29-31页 |
| ·cDNA的制备 | 第30页 |
| ·cDNA的鉴定 | 第30-31页 |
| ·罗非鱼MyD88基因部分序列的PCR扩增及纯化 | 第31-35页 |
| ·引物设计及合成 | 第31页 |
| ·中间序列扩增 | 第31-32页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第32页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第32页 |
| ·连接反应 | 第32-33页 |
| ·感受态的制备 | 第33页 |
| ·转化 | 第33页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第33-34页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第34-35页 |
| ·罗非鱼MyD88 cDNA全长的获得 | 第35-40页 |
| ·MyD88序列3'RACE | 第35-36页 |
| ·MyD88序列5'RACE | 第36-40页 |
| ·罗非鱼MyD88结构及序列分析 | 第40页 |
| 3 实验结果 | 第40-51页 |
| ·RNA样品的制备与鉴定 | 第40页 |
| ·cDNA样品的制备与鉴定 | 第40-41页 |
| ·罗非鱼MyD88 cDNA部分片段的PCR扩增 | 第41-42页 |
| ·罗非鱼MyD88 cDNA3'和5'端的获得 | 第42页 |
| ·罗非鱼MyD88 cDNA序列分析 | 第42-43页 |
| ·罗非鱼MyD88氨基酸同源性及进化分析 | 第43-51页 |
| 第三章 罗非鱼MyD88基因荧光定量PCR检测方法的建立 | 第51-61页 |
| 1 材料 | 第51页 |
| ·实验鱼 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·仪器 | 第51页 |
| 2 方法 | 第51-53页 |
| ·总RNA提取及反转录 | 第51-52页 |
| ·MyD88基因定量平台的建立 | 第52-53页 |
| ·引物的设计 | 第52页 |
| ·扩增效率检测及熔解曲线建立 | 第52-53页 |
| ·扩增产物的序列验证 | 第53页 |
| ·平台的初步检测 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-57页 |
| ·扩增结果 | 第53-55页 |
| ·扩增曲线及熔解曲线分析 | 第53-54页 |
| ·扩增产物鉴定结果 | 第54-55页 |
| ·标准曲线的建立 | 第55页 |
| ·平台的初步检测 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-61页 |
| 第四章 奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼MyD88的表达分析 | 第61-69页 |
| 1 材料 | 第61页 |
| ·实验鱼 | 第61页 |
| ·试剂和仪器 | 第61页 |
| 2 方法 | 第61-62页 |
| ·罗非鱼各组织RNA的提取及反转录 | 第61页 |
| ·各组织定量分析 | 第61-62页 |
| 3 结果 | 第62-65页 |
| ·组织定量结果 | 第62-64页 |
| ·MyD88基因组织差异表达分析 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-69页 |
| 全文结论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 附录 实验试剂及配置 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及参与课题 | 第81页 |