| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 目录 | 第12-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-34页 |
| 第一节 水稻条纹病毒分子生物学研究进展 | 第15-21页 |
| 1 水稻条纹病毒的基因组结构和功能 | 第15-21页 |
| ·水稻条纹病毒的基因组结构 | 第16-17页 |
| ·水稻条纹病毒编码的蛋白功能 | 第17-19页 |
| ·RNA1编码的RdRp | 第17页 |
| ·CP、病害特异性蛋白(disease-specific protein,SP) | 第17-18页 |
| ·可能编码移动蛋白(movement protein,MP)的基因 | 第18-19页 |
| ·RSV编码的NS3蛋白的功能 | 第19页 |
| ·存在的问题和展望 | 第19-21页 |
| 第二节 植物病毒与寄主互作的研究现状及其研究方法 | 第21-24页 |
| 1 病毒与寄主互作因子研究现状 | 第21页 |
| 2 病毒与寄主互作因子研究的研究方法 | 第21-24页 |
| ·酵母双杂交实验 | 第21-22页 |
| ·双分子荧光互补实验 | 第22页 |
| ·GST pull down实验 | 第22-23页 |
| ·免疫共沉淀Co-IP | 第23-24页 |
| 第三节 水稻齿叶矮缩病毒研究进展 | 第24-34页 |
| 1 RRSV的基因组结构及编码的蛋白功能 | 第24-26页 |
| 2 病毒形状及其传播 | 第26页 |
| 3 植物病毒常用的鉴定方法 | 第26-34页 |
| ·生物学鉴定 | 第26-27页 |
| ·电镜观测 | 第27页 |
| ·分子生物学方法 | 第27-28页 |
| ·血清学方法检测 | 第28页 |
| ·单克隆抗体技术及其在植物病毒学中的应用 | 第28-34页 |
| ·抗体的基本结构及其特性 | 第29页 |
| ·单克隆抗体技术 | 第29-34页 |
| ·杂交瘤技术基本原理 | 第29-32页 |
| ·杂交瘤技术基本流程 | 第32页 |
| ·单克隆抗体在植物病毒学中的应用的意义 | 第32-34页 |
| 第二章 研究内容 | 第34-69页 |
| 第一节 水稻条纹病毒病程相关蛋白SP与寄主互作因子研究 | 第34-56页 |
| 1 材料与方法 | 第34-47页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·菌株、质粒和cDNA文库 | 第34页 |
| ·主要生化试剂 | 第34-35页 |
| ·诱饵质粒的构建 | 第35-40页 |
| ·诱饵蛋白毒性及自激活检测 | 第40-41页 |
| ·酵母菌株的活化 | 第40页 |
| ·含SP基因的质粒转化酵母菌株Y2H Gold(小量法) | 第40页 |
| ·SP蛋白对酵母毒性及其自激活活性的检测 | 第40-41页 |
| ·酵母双杂交实验 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的活化和菌株的验证 | 第41页 |
| ·酵母感受态细胞的制备(LiAc法) | 第41页 |
| ·共转化酵母菌株Y2H Go1d | 第41-42页 |
| ·SP蛋白互作因子筛选 | 第42页 |
| ·酵母质粒的提取 | 第42-43页 |
| ·候选的寄主因子的分离、测序并比对、确定蛋白类型 | 第43-44页 |
| ·候选的寄主因子全长cDNA的克隆及其酵母双杂交载体的构建 | 第44-45页 |
| ·将构建好的全长基因的重组质粒转化进酵母菌株Y2H Gold进行互作验证 | 第45页 |
| ·酵母菌株的活化 | 第45页 |
| ·酵母双杂交(小量法) | 第45页 |
| ·BiFC验证SP蛋白与寄主因子在植物体内的互作 | 第45-47页 |
| ·BiFC载体的克隆 | 第45-46页 |
| ·电击转化进农杆菌C_(58)C_1菌株 | 第46-47页 |
| ·农杆菌浸润接种本氏烟 | 第47页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察互作结果 | 第47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-55页 |
| ·诱饵质粒的构建 | 第47-48页 |
| ·SP蛋白对酵母毒性及其自激活活性的检测 | 第48页 |
| ·酵母双杂交筛库、基因片段Blast比对分析和互作寄主基因的克隆 | 第48-50页 |
| ·筛库质粒回转酵母互作验证 | 第50页 |
| ·寄主因子基因的全长克隆 | 第50-52页 |
| ·R3H domain、Rubisco和Ribosomal蛋白的全长与SP蛋白的酵母双杂交互作情况验证 | 第52-53页 |
| ·含有R3H domain的蛋白与SP互作的双分子荧光互补实验(BiFC)验证 | 第53-55页 |
| 3 讨论 | 第55-56页 |
| 第二节 水稻齿叶矮缩病毒单克隆抗体的制备 | 第56-69页 |
| 1 材料 | 第56-63页 |
| ·病毒 | 第56页 |
| ·菌株和质粒 | 第56页 |
| ·BALB/c小鼠 | 第56页 |
| ·生化试剂、酶及kit | 第56-57页 |
| ·RRSV的外壳蛋白原核表达载体的构建及蛋白的诱导表达 | 第57页 |
| ·构建好的原核表达载体的诱导表达 | 第57页 |
| ·表达产物在变性条件下的纯化 | 第57-58页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE及Western blot鉴定 | 第58-60页 |
| ·单克隆抗体的制备及检测应用 | 第60页 |
| ·免疫动物 | 第60-62页 |
| ·细胞融合及培养 | 第60-61页 |
| ·杂交瘤细胞的单克隆化及扩增 | 第61页 |
| ·杂交瘤细胞株的保存和复苏 | 第61页 |
| ·腹水抗体制备及纯化 | 第61-62页 |
| ·腹水抗体制备 | 第61-62页 |
| ·单抗的纯化 | 第62页 |
| ·酶联免疫吸附分析法(ELISA) | 第62-63页 |
| ·用制备的抗体建立测定RRSV的dot-ELISA方法 | 第63页 |
| 2 结果与分析 | 第63-68页 |
| ·RRSV外壳蛋白基因(CP)的克隆及其原核表达载体的构建 | 第63-64页 |
| ·RRSV外壳蛋白的原核表达 | 第64-65页 |
| ·杂交瘤细胞的融合、筛选与克隆 | 第65页 |
| ·dot-ELISA检测水稻内RRSV方法的建立和应用 | 第65-67页 |
| ·dot-ELISA检测褐飞虱体内RRSV方法的建立及其田间样品检测 | 第67-68页 |
| 3 讨论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-80页 |
| 附录A 常用生化及分子生物学试剂与仪器 | 第80-81页 |
| 附录B 常用缓冲液及培养基配方 | 第81-85页 |
| 在校期间科研成果 | 第85页 |
