| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-22页 |
| 1 猪流行性腹泻的流行情况 | 第12-13页 |
| 2 猪流行性腹泻病毒的病原性特性 | 第13-14页 |
| 3 猪流行性腹泻病毒主要结构蛋白的研究进展 | 第14-17页 |
| 4 猪流行性腹泻的发病机理 | 第17页 |
| 5 猪流行性腹泻的临床症状及病理变化 | 第17页 |
| 6 猪流行性腹泻的诊断方法 | 第17-20页 |
| ·分离鉴定 | 第18页 |
| ·免疫电镜法(IEM) | 第18页 |
| ·免疫荧光法 | 第18页 |
| ·间接血凝试验 | 第18页 |
| ·微量血清中和试验 | 第18-19页 |
| ·ELISA法 | 第19页 |
| ·PCR法 | 第19页 |
| ·胶体金抗体检测技术 | 第19-20页 |
| 7 猪流行性腹泻的防制 | 第20-21页 |
| 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二部分 实验研究 | 第22-55页 |
| 第一章 流行性腹泻病毒的分离与鉴定 | 第22-36页 |
| 1 材料 | 第22-24页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·样品 | 第22页 |
| ·细胞系 | 第22-23页 |
| ·主要试剂及配制 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·试剂配制 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23-24页 |
| ·其他 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-28页 |
| ·样品的采集 | 第24页 |
| ·样品的处理 | 第24页 |
| ·细胞的复苏与培养 | 第24页 |
| ·PEDV病毒的分离与培养 | 第24-25页 |
| ·胰酶对VERO细胞的毒性测定 | 第24页 |
| ·PEDV病毒的培养 | 第24-25页 |
| ·分离病毒的鉴定 | 第25-28页 |
| ·分离病毒的PCR鉴定 | 第25-26页 |
| ·分离病毒的培养特性 | 第26页 |
| ·分离病毒细胞半数感染量(TCID50)的测定 | 第26页 |
| ·分离病毒核酸类型的鉴定 | 第26-27页 |
| ·分离病毒理化性质的测定 | 第27页 |
| ·分离病毒的电镜观察 | 第27-28页 |
| 3 结果 | 第28-34页 |
| ·胰酶对VERO细胞的毒性测定结果 | 第28页 |
| ·分离病毒培养结果 | 第28页 |
| ·分离病毒鉴定结果 | 第28-34页 |
| ·分离病毒的PCR鉴定结果 | 第28-29页 |
| ·分离病毒的培养特性结果 | 第29页 |
| ·分离病毒细胞半数感染量(TCID_(50))测定结果 | 第29-30页 |
| ·分离病毒的核酸类型鉴定结果 | 第30-31页 |
| ·分离病毒理化性质的测定结果 | 第31-34页 |
| ·分离病毒的电镜观察结果 | 第34页 |
| 4 讨论 | 第34-35页 |
| 5 小结 | 第35-36页 |
| 第二章 猪流行性腹泻病毒S基因和N基因的序列分析 | 第36-55页 |
| 1 材料 | 第36-37页 |
| ·病毒与细胞 | 第36页 |
| ·载体与菌株 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36-37页 |
| ·试剂配制 | 第37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-42页 |
| ·PEDV SC-L株S基因和N基因引物设计 | 第37-38页 |
| ·PEDV SC-L株的增殖 | 第38页 |
| ·PEDV SC-L株总RNA的提取 | 第38-39页 |
| ·PEDV SC-L株S2基因N基因的扩增 | 第39-40页 |
| ·PEDV SC-L株S2基因和N基因cDNA的合成 | 第39页 |
| ·PEDV SC-L株S2基因和N基因的PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·PEDV SC-L株S2基因和N基因的克隆与鉴定 | 第40-42页 |
| ·PEDV SC-L株S2基因和N基因PCR产物的胶回收 | 第40页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第40页 |
| ·PEDV SC-L株S2基因和N基因与T载体连接 | 第40-41页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第41页 |
| ·PEDV SC-L株S2基因和N基因重组克隆质粒的鉴定 | 第41-42页 |
| ·PEDV SC-L株S2基因和N基因的核苷酸序列测定 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-53页 |
| ·PEDV SC-L株基因和N基因的RT-PCR扩增结果 | 第42页 |
| ·PEDV SC-L株S2基因和N基因PCR产物的胶回收结果 | 第42-43页 |
| ·PEDV SC-L株S2基因和N基因重组质粒的鉴定结果 | 第43-44页 |
| ·PEDV SC-L株S2基因和N基因测序结果 | 第44-48页 |
| ·PEDV SC-L株S1基因的核苷酸序列 | 第44-45页 |
| ·PEDV SC-L株S2基因的核苷酸序列 | 第45-46页 |
| ·PEDV SC-L株S1基因和S2基因的序列拼接 | 第46-47页 |
| ·PEDV SC-L株N基因的核苷酸序列 | 第47-48页 |
| ·PEDV SC-L株S基因和N基因编码的氨基酸序列 | 第48-49页 |
| ·PEDV SC-L株拼接后的S基因编码的氨基酸序列 | 第48-49页 |
| ·PEDV SC-L株N基因编码的氨基酸序列 | 第49页 |
| ·PEDV SC-L株S基因和N基因序列分析 | 第49-51页 |
| ·PEDV SC-L株S基因和N基因的系统发育进化分析 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-54页 |
| ·关于引物 | 第53页 |
| ·对克隆基因的分析 | 第53-54页 |
| ·对S基因的分析 | 第53-54页 |
| ·对N基因的分析 | 第54页 |
| 5 小结 | 第54-55页 |
| 全文结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
