| 提要 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-26页 |
| 一、 miRNA 的生物发生 | 第15-16页 |
| 二、 miRNA 的生物功能 | 第16-17页 |
| 三、 miRNA 与肿瘤 | 第17-19页 |
| 四、 miRNA 与疾病的诊断和治疗 | 第19-20页 |
| 五、 miRNA 体内调控体制的理论认识 | 第20-22页 |
| 六、 miR-1/499、miR-483-3p 与 ets1、PDGFB | 第22页 |
| 七、 论文设计 | 第22-26页 |
| 1. 论文目的 | 第22-23页 |
| 2. 实验设计 | 第23-26页 |
| 第二章 miR-1/miR-499 下调原癌基因 ets1 表达的研究 | 第26-64页 |
| 一、 实验材料 | 第26-31页 |
| 1．细胞系 | 第26页 |
| 2．主要试剂 | 第26-27页 |
| 3．细胞、细菌培养所需溶液 | 第27-28页 |
| 4. SDS-PAGE 电泳和 Western blot 实验用溶液 | 第28-29页 |
| 5. 免疫组化实验所需溶液 | 第29页 |
| 6. 明胶酶谱实验所需溶液 | 第29-30页 |
| 7. 引物 | 第30-31页 |
| 二、 实验方法 | 第31-43页 |
| 1．细胞培养 | 第31页 |
| 2. 基因组 DNA 提取 | 第31页 |
| 3．真核细胞总 RNA 的提取 | 第31-32页 |
| 4．逆转录生成 cDNA | 第32页 |
| 5．实时定量 PCR 检测 ets1 mRNA 的表达 | 第32-33页 |
| 6．包含 ets13′非翻译区的报告基因载体的构建 | 第33-37页 |
| 7．细胞转染 | 第37-38页 |
| 8．真核细胞内蛋白的裂解及 western-blot 检测 | 第38-39页 |
| 9．双荧光素酶报告基因检测 | 第39页 |
| 10．细胞侵袭转移实验 | 第39-40页 |
| 11. 细胞克隆形成实验 | 第40-41页 |
| 12. 流式仪检测细胞周期 | 第41页 |
| 13. 流式仪检测细胞凋亡 | 第41-42页 |
| 14. 明胶酶谱测定金属基质蛋白酶活性 | 第42页 |
| 15. 免疫组化检测肝癌病理组织中 Ets1 的表达 | 第42-43页 |
| 三、 实验结果 | 第43-57页 |
| 1. miR-1/miR-499 特异性靶向 ets1 的 mRNA 3′UTR | 第43-47页 |
| 2. miR-1 和 miR-499 影响内源性 ets1 的表达 | 第47-49页 |
| 3. miR-1 和 miR-499 抑制 ets1 对肿瘤细胞功能的影响 | 第49-55页 |
| 4. 受 miR-1 和 miR-499 抑制后 Ets1 下游蛋白的表达 | 第55-56页 |
| 5. 免疫组化检测肝癌病理组织中 Ets1 的表达 | 第56-57页 |
| 四、 讨论 | 第57-61页 |
| 五、 小结 | 第61-64页 |
| 第三章 miR-483-3p 下调血小板衍生生长因子 PDGFB 的研究 | 第64-78页 |
| 一、 实验材料 | 第64-66页 |
| 1．细胞系及菌株 | 第64页 |
| 2．主要试剂 | 第64-65页 |
| 3. 引物 | 第65-66页 |
| 二、 实验方法 | 第66-68页 |
| 1．细胞培养 | 第66页 |
| 2．细胞转染 | 第66-67页 |
| 3．真核细胞内蛋白的裂解及 western-blot 检测 | 第67页 |
| 4. Cell Counting Kit-8（CCK8）检测细胞生长 | 第67页 |
| 5．细胞转移实验（Trsnswell Assay） | 第67-68页 |
| 6. Endothelial Tube Formation Assay 体外检测血管生成 | 第68页 |
| 三、 实验结果 | 第68-75页 |
| 1. miR-483-3p 负调控 PDGFB 的表达 | 第68-70页 |
| 2. miR-483-3p 负调控 PDGFB 对血管生成的影响 | 第70-73页 |
| 3. miR-483-3p 负调控 PDGFB 对 Akt 信号通路的影响 | 第73-75页 |
| 四、 讨论 | 第75-77页 |
| 五、 小结 | 第77-78页 |
| 结论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 主要仪器与设备 | 第84-86页 |
| 个人简历 | 第86-88页 |
| 后记和致谢 | 第88页 |
