| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-51页 |
| ·DC的特点、分类及其生物学功能 | 第21-22页 |
| ·DC在肿瘤免疫治疗中的作用 | 第22-23页 |
| ·DC在体外分离及诱导扩增方法 | 第23-25页 |
| ·人外周血单个核细胞(PBMC)来源的DC | 第23-24页 |
| ·人骨髓干细胞来源的DC | 第24页 |
| ·人脾脏组织来源的DC | 第24页 |
| ·小鼠脾脏来源的DC | 第24-25页 |
| ·小鼠骨髓来源的DC | 第25页 |
| ·DC疫苗的构建策略 | 第25-29页 |
| ·肿瘤抗原肽致敏DC | 第25-26页 |
| ·肿瘤细胞与DC融合 | 第26-27页 |
| ·肿瘤细胞DNA和RNA转染DC | 第27-28页 |
| ·细胞因子及共刺激分子基因修饰DC | 第28-29页 |
| ·亚细胞结构修饰DC | 第29页 |
| ·DC疫苗的临床应用及前景 | 第29-31页 |
| ·GITRL/GITR的发现 | 第31页 |
| ·GITRL与GITR结构、分布与功能 | 第31-39页 |
| ·GITR与GITRL的结构 | 第31-34页 |
| ·GITR和GITRL的组织分布和表达 | 第34-35页 |
| ·GITRL/GITR的功能 | 第35-39页 |
| ·GITRL/GITR在疾病中的作用 | 第39-51页 |
| ·GITRL/GITR在自身免疫性疾病中的作用 | 第39-40页 |
| ·GITRL/GITR在肿瘤中的作用 | 第40-49页 |
| ·GITRL/GITR在炎症中的作用 | 第49-51页 |
| 第二章 携带小鼠GITRL基因腺病毒的制备与鉴定 | 第51-69页 |
| ·实验仪器和材料 | 第51-55页 |
| ·实验仪器 | 第51-52页 |
| ·腺病毒包装系统一AdEasy Adenoviral Vector System | 第52-53页 |
| ·细胞培养用材料 | 第53页 |
| ·分子克隆所用的工具酶及材料 | 第53-54页 |
| ·主要溶液配制 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-63页 |
| ·小鼠GITRL基因重组腺病毒表达载体的构建 | 第55-59页 |
| ·小鼠GITRL基因重组腺病毒(pAd-GITRL)的包装、扩增及滴度测定 | 第59-61页 |
| ·pAd-GITRL感染293A细胞后表达产物的鉴定 | 第61-63页 |
| ·实验结果 | 第63-66页 |
| ·pAdtrack-GITRL穿梭载体的构建及鉴定 | 第63页 |
| ·重组腺病毒载体的鉴定 | 第63-64页 |
| ·pAd-GITRL滴度 | 第64-65页 |
| ·pAd-GITRL感染293A细胞后表达产物的鉴定 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-69页 |
| 第三章 pAd-GITRL转染小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)的实验研究 | 第69-85页 |
| ·实验仪器和材料 | 第69-70页 |
| ·实验仪器 | 第69-70页 |
| ·细胞培养用材料 | 第70页 |
| ·主要试剂 | 第70页 |
| ·主要溶液配制 | 第70页 |
| ·实验动物 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70-75页 |
| ·BMDC的诱导和培养 | 第70-71页 |
| ·pAd-GITRL转染BMDC时最佳感染滴度(MOI)的选择 | 第71-72页 |
| ·pAd-GITRL转染前后BMDC表面MHCⅡ类分子及共刺激分子的检测 | 第72页 |
| ·体外小鼠T细胞分离纯化 | 第72-74页 |
| ·体外CD4~+T细胞增殖试验及Treg细胞抑制试验 | 第74页 |
| ·统计学分析 | 第74-75页 |
| ·实验结果 | 第75-81页 |
| ·体外诱导BMDC的形态特征与纯度测定 | 第75-76页 |
| ·pAd-GITRL转染BMDC的效率 | 第76-77页 |
| ·pAd-GITRL转染BMDC(pAd-GITRL-BMDC)表面GITRL的表达情况 | 第77-78页 |
| ·pAd-GITRL-BMDC表面MHCⅡ类分子及共刺激分子的表达情况 | 第78-79页 |
| ·pAd-GITRL-BMDC体外促进CD4~+CD25-T细胞的增殖 | 第79-80页 |
| ·pAd-GITRL-BMDC体外下调Treg细胞的免疫抑制功能 | 第80-81页 |
| ·讨论 | 第81-85页 |
| 第四章 pAd-GITRL-BMDC增强Lewis肺癌移植瘤小鼠抗瘤免疫应答的实验研究 | 第85-107页 |
| ·实验仪器和材料 | 第85-87页 |
| ·实验仪器 | 第85页 |
| ·主要材料 | 第85-86页 |
| ·主要溶液配制 | 第86-87页 |
| ·细胞培养用材料 | 第87页 |
| ·实验动物 | 第87页 |
| ·重组腺病毒 | 第87页 |
| ·实验方法 | 第87-92页 |
| ·Lewis肺癌细胞体外培养 | 第87页 |
| ·小鼠Lewis肺癌移植瘤模型的建立及鉴定 | 第87-88页 |
| ·pAd-GITRL和pAd-null转染BMDC | 第88页 |
| ·Lewis肺癌细胞抗原负载BMDC | 第88页 |
| ·观察荷瘤小鼠肿瘤的生长情况及生存期 | 第88-89页 |
| ·FCM检测荷瘤小鼠脾脏中CD8~+IFN-γ~+T细胞、CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞和CD4~+IL-17~+T细胞 | 第89-90页 |
| ·qRT-PCR检测肿瘤组织中GITRL、IFN-γ、Foxp3、IL-17、ROR-γt和CCL20的表达 | 第90-91页 |
| ·免疫荧光法检测肿瘤组织中CD8~+IFN-γ~+T细胞、CD4~+Foxp3+T细胞和CD4~+IL-17~+T细胞 | 第91-92页 |
| ·统计学处理 | 第92页 |
| ·实验结果 | 第92-102页 |
| ·小鼠肺癌移植瘤瘤模型的鉴定结果 | 第92页 |
| ·pAd-GITRL-BMDC抑制荷瘤小鼠肿瘤生长 | 第92-93页 |
| ·pAd-GITRL-BMDC延长荷瘤小鼠生存期 | 第93-94页 |
| ·pAd-GITRL-BMDC增加荷瘤小鼠脾脏中CD8~+IFN-γ~+T细胞的比例 | 第94页 |
| ·pAd-GITRL-BMDC减少荷瘤小鼠脾脏中CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞数量 | 第94-96页 |
| ·pAd-GITRL-BMDC增加肿瘤组织中CD8~+IFN-γ~+T细胞和CD4~+IL-17~+T细胞数量,上调GITRL、IFN-γ、IL-17、ROR-γt和CCL #20mRNA的表达 | 第96-101页 |
| ·pAd-GITRL-BMDC减少肿瘤组织中CD4~+Foxp3~+T细胞数量,下调Foxp3 mRNA的表达 | 第101-102页 |
| ·讨论 | 第102-107页 |
| 结论 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-121页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第121-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
