| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-24页 |
| ·1,3-丙二醇的介绍 | 第11-12页 |
| ·1,3-丙二醇的性质与应用 | 第11页 |
| ·1,3-丙二醇的市场需求及生产状况 | 第11-12页 |
| ·1,3-丙二醇的生产方法 | 第12页 |
| ·微生物转化法生产1,3-丙二醇 | 第12-14页 |
| ·生产菌种 | 第12-13页 |
| ·甘油的代谢途径 | 第13-14页 |
| ·基因工程菌生产1,3-丙二醇的研究 | 第14-19页 |
| ·基因工程菌的构建策略 | 第14-15页 |
| ·通过基因敲除的方法构建合成1,3-丙二醇的基因工程菌 | 第15-16页 |
| ·在Saccharomyces cerevisiae中构建合成1,3-丙二醇的基因工程菌 | 第16-17页 |
| ·在Klebsiella pneumoniae中构建合成1,3-丙二醇的基因工程菌 | 第17-18页 |
| ·在E.coli中表达dha操纵子相关基因 | 第18页 |
| ·在E.coli中构建利用葡萄糖合成1,3-丙二醇的基因工程菌 | 第18-19页 |
| ·1,3-丙二醇生物合成途径中的关键酶 | 第19-23页 |
| ·甘油脱水酶 | 第19-20页 |
| ·1,3-丙二醇氧化还原酶 | 第20-21页 |
| ·醛还原酶 | 第21-23页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 2 1,3-丙二醇氧化还原酶的辅酶特异性改造 | 第24-39页 |
| ·引言 | 第24页 |
| ·实验材料和仪器 | 第24-26页 |
| ·菌株、质粒和试剂 | 第24-25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·仪器 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-31页 |
| ·Klebsiella pneumoniae基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhaT的克隆 | 第27-28页 |
| ·1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhaT的定点突变 | 第28-29页 |
| ·1,3-丙二醇氧化还原酶及其突变酶在大肠杆菌中的表达 | 第29页 |
| ·1,3-丙二醇氧化还原酶及其突变酶的酶活力测定 | 第29-30页 |
| ·1,3-丙二醇氧化还原酶及其突变酶的纯化 | 第30-31页 |
| ·实验结果与讨论 | 第31-38页 |
| ·1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhaT的克隆 | 第31-32页 |
| ·1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhaT的定点突变 | 第32-33页 |
| ·1,3-丙二醇氧化还原酶及其突变酶在大肠杆菌中的表达 | 第33-34页 |
| ·1,3-丙二醇氧化还原酶及其突变酶的纯化和酶活力测定 | 第34-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 3 醛还原酶的克隆、表达与表征 | 第39-53页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·实验材料和仪器 | 第39页 |
| ·菌株、质粒和试剂 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-42页 |
| ·醛还原酶基因yqhD的克隆 | 第39-40页 |
| ·序列测定 | 第40页 |
| ·醛还原酶在大肠杆菌中的表达 | 第40-41页 |
| ·醛还原酶的酶活力测定 | 第41页 |
| ·醛还原酶的纯化与表征 | 第41-42页 |
| ·实验结果与讨论 | 第42-51页 |
| ·醛还原酶基因yqhD的克隆 | 第42-43页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定结果 | 第43-44页 |
| ·测序结果 | 第44-45页 |
| ·醛还原酶在大肠杆菌中的表达 | 第45-46页 |
| ·醛还原酶的纯化与表征 | 第46-51页 |
| ·小结 | 第51-53页 |
| 4 基因工程菌发酵甘油生产1,3-丙二醇的研究 | 第53-69页 |
| ·引言 | 第53-54页 |
| ·实验材料和仪器 | 第54-55页 |
| ·菌株、质粒和试剂 | 第54页 |
| ·培养基 | 第54-55页 |
| ·仪器 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-59页 |
| ·重组质粒的构建与双酶切检验 | 第55-57页 |
| ·重组K.pneumoniae DSM2026(pDK6-OX)的构建及检验 | 第57-58页 |
| ·重组K.pneumoniae DSM2026(pDK6-OX)发酵甘油生产1,3-丙二醇 | 第58-59页 |
| ·实验结果与讨论 | 第59-67页 |
| ·重组质粒的构建与双酶切检验 | 第59-61页 |
| ·重组K.pneumoniae DSM2026(pDK6-OX)的构建及检验 | 第61-62页 |
| ·重组K.pneumoniae DSM2026(pDK6-OX)发酵甘油生产1,3-丙二醇 | 第62-67页 |
| ·小结 | 第67-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 附录A 序列 | 第74-75页 |
| 附录B Marker | 第75-76页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
