| 中文摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 1 前言 | 第17-33页 |
| ·高温胁迫对植物的影响 | 第18-21页 |
| ·高温对植物光合作用的影响 | 第18-19页 |
| ·高温对植物体内蛋白质代谢的影响 | 第19页 |
| ·高温对植物生物膜系统的影响 | 第19-20页 |
| ·高温对细胞内抗氧化系统的影响 | 第20-21页 |
| ·植物体内的热激蛋白 | 第21-31页 |
| ·热激蛋白的研究进展 | 第21-25页 |
| ·热激蛋白的分类 | 第21-23页 |
| ·热激蛋白的特点 | 第23页 |
| ·热激蛋白的功能 | 第23-25页 |
| ·小分子量热激蛋白的研究进展 | 第25-30页 |
| ·小分子量热激蛋白序列特征 | 第26页 |
| ·小分子量热激蛋白的分子伴侣功能 | 第26-28页 |
| ·小分子量热激蛋白基因表达调控 | 第28-30页 |
| ·小分子量热激蛋白的转基因工程研究 | 第30-31页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第31-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-60页 |
| ·实验材料 | 第33-38页 |
| ·植物材料 | 第33页 |
| ·菌株与质粒 | 第33页 |
| ·酶及生化试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·PCR 引物 | 第33-34页 |
| ·培养基成份 | 第34-36页 |
| ·植物材料培养与处理 | 第36-38页 |
| ·实验方法 | 第38-59页 |
| ·植物材料总 RNA 的提取 | 第38-39页 |
| ·反转录获得 cDNA 第一条链 | 第39-40页 |
| ·玉米胞质热激蛋白 ZmHSP16.9 基因的分离 | 第40页 |
| ·连接反应 | 第40页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化及克隆筛选 | 第41页 |
| ·碱法小量提取质粒 DNA | 第41-42页 |
| ·质粒 DNA 的酶切鉴定 | 第42页 |
| ·DNA 序列测定 | 第42-43页 |
| ·Northern 杂交分析 | 第43-46页 |
| ·植物材料总 RNA 的提取 | 第43页 |
| ·甲醛变性胶电泳 | 第43-44页 |
| ·转膜 | 第44-45页 |
| ·预杂交 | 第45页 |
| ·探针制备 | 第45-46页 |
| ·杂交 | 第46页 |
| ·洗膜 | 第46页 |
| ·放射自显影 | 第46页 |
| ·Southern 杂交分析 | 第46-47页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第46-47页 |
| ·基因组 DNA 的限制性内切酶消化 | 第47页 |
| ·转膜 | 第47页 |
| ·预杂交 | 第47页 |
| ·探针制备 | 第47页 |
| ·杂交 | 第47页 |
| ·洗膜 | 第47页 |
| ·放射自显影 | 第47页 |
| ·ZmHSP16.9 的原核表达及抗体制备 | 第47-50页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·大肠杆菌 BL21 原核表达的诱导 | 第48-49页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第49-50页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第50页 |
| ·原核表达 ZmHSP16.9 重组蛋白抗体制备及效价测定 | 第50页 |
| ·Western blot 检测蛋白表达 | 第50-52页 |
| ·蛋白质提取及含量测定 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE | 第51页 |
| ·半干法转移蛋白 | 第51-52页 |
| ·封闭及杂交 | 第52页 |
| ·显色 | 第52页 |
| ·洋葱表皮亚细胞定位 | 第52-53页 |
| ·pBI121-ZmHSP16.9-GFP 表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·pBI121-ZmHSP16.9-GFP 重组蛋白亚细胞定位 | 第53页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第53-56页 |
| ·表达载体的构建 | 第53-55页 |
| ·根癌农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备与转化 | 第55页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第55-56页 |
| ·农杆菌介导的烟草转化 | 第56页 |
| ·转基因植株的 PCR 检测 | 第56-58页 |
| ·CTAB 微量法提取基因组 DNA | 第56-57页 |
| ·转基因烟草的鉴定 | 第57-58页 |
| ·转基因烟草植株生理指标测定 | 第58-59页 |
| ·H2O2含量测定 | 第58页 |
| ·抗氧化酶活性测定 | 第58页 |
| ·丙二醛含量测定 | 第58-59页 |
| ·相对电导率的测定 | 第59页 |
| ·可溶性蛋白含量的测定 | 第59页 |
| ·DAB 和 NBT 染色 | 第59页 |
| ·叶片中叶绿素含量的测定 | 第59页 |
| ·超氧阴离子自由基含量测定 | 第59页 |
| ·统计分析 | 第59-60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-79页 |
| ·玉米小分子量热激蛋白 ZmHSP16.9 基因的分离 | 第60页 |
| ·ZmHSP16.9 基因的序列分析 | 第60-64页 |
| ·ZmHSP16.9 基因全长 cDNA 分析 | 第60-61页 |
| ·ZmHSP16.9 基因编码蛋白序列分析 | 第61-62页 |
| ·ZmHSP16.9 基因与其他植物中 classⅠsHSPs 同源性比较分析 | 第62-63页 |
| ·ZmHSP16.9 基因序列系统发生分析 | 第63-64页 |
| ·ZmHSP16.9 的亚细胞定位 | 第64-66页 |
| ·ZmHSP16.9 的原核表达及抗体制备 | 第66-68页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第66页 |
| ·目的蛋白原核表达及重组蛋白纯化 | 第66-67页 |
| ·目的蛋白的免疫及效价测定 | 第67-68页 |
| ·ZmHSP16.9 在玉米中的诱导表达模式分析 | 第68-70页 |
| ·ZmHSP16.9 基因在玉米基因组中的拷贝数分析 | 第68页 |
| ·ZmHSP16.9 在玉米不同器官中的表达分析 | 第68-70页 |
| ·ZmHSP16.9 在逆境胁迫下的表达分析 | 第70页 |
| ·ZmHSP16.9 在蛋白水平对高温和氧化胁迫的响应 | 第70页 |
| ·ZmHSP16.9 基因转化烟草研究 | 第70-72页 |
| ·转基因表达载体的构建及转化 | 第70-71页 |
| ·转基因烟草的鉴定 | 第71-72页 |
| ·过表达 ZmHSP16.9 基因增强了转基因烟草对高温胁迫的抗性 | 第72-76页 |
| ·高温胁迫下转 ZmHSP16.9 基因烟草种子萌发率提高 | 第72页 |
| ·高温胁迫下转 ZmHSP16.9 基因烟草幼苗耐热性提高 | 第72-73页 |
| ·高温胁迫下转 ZmHSP16.9 基因烟草丙二醛含量和相对电导率下降 | 第73-74页 |
| ·高温胁迫下转 ZmHSP16.9 基因烟草叶片活性氧水平下降 | 第74-75页 |
| ·高温胁迫下转 ZmHSP16.9 基因烟草叶片抗氧化酶活性提高 | 第75-76页 |
| ·过表达 ZmHSP16.9 基因增强了转基因烟草对氧化胁迫的抗性 | 第76-79页 |
| ·过表达 ZmHSP16.9 基因烟草种子萌发对氧化胁迫的响应 | 第76-77页 |
| ·过表达 ZmHSP16.9 基因烟草幼苗生长期抗氧化能力增强 | 第77页 |
| ·过表达 ZmHSP16.9 基因烟草成苗期抗氧化能力增强 | 第77-79页 |
| 4 讨论 | 第79-84页 |
| ·ZmHSP16.9 属于胞质 I 类 sHSP | 第79-80页 |
| ·逆境胁迫和信号物质对 ZmHSP16.9 基因的表达调控 | 第80-81页 |
| ·过表达 ZmHSP16.9 基因增强转基因烟草对高温胁迫的抗性 | 第81-82页 |
| ·过表达 ZmHSP16.9 基因提高了转基因烟草的抗氧化能力 | 第82-84页 |
| 5 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第100页 |
