| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 第一部分 研究论文 | 第11-78页 |
| 第一章 绵羊和绒山羊CRISPs家族成员cDNA的克隆 | 第11-30页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 一、材料和方法 | 第12-17页 |
| ·材料 | 第12-13页 |
| ·方法 | 第13-17页 |
| 二、结果 | 第17-29页 |
| ·绒山羊睾丸、附睾组织总RNA的提取 | 第17页 |
| ·RT-PCR产物琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第17-18页 |
| ·重组克隆T载体的构建鉴定 | 第18页 |
| ·绒山羊和绵羊CRISPs cDNA全长测序结果分析 | 第18-22页 |
| ·以绒山羊CRISP2为代表进行氨基酸序列的分析 | 第22-23页 |
| ·绒山羊CRISP2二级结构和性质以及三维结构图 | 第23-25页 |
| ·不同动物的CRISP蛋白氨基酸序列的比较分析 | 第25-29页 |
| 三、讨论 | 第29-30页 |
| 第二章 绒山羊CRISPs家族的融合蛋白的原核表达及GST-CRISP2蛋白的分离纯化 | 第30-43页 |
| 前言 | 第30-31页 |
| 一、材料和方法 | 第31-37页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-37页 |
| 二、结果 | 第37-42页 |
| ·pGEX-GC1、pGEX-GC2、pET44a-GC3重组载体的酶切及测序鉴定 | 第37页 |
| ·pGEX-GC1、pGEX-GC2、pET44a-GC3在大肠杆菌中的诱导表达 | 第37-39页 |
| ·GST-CRISP1、GST-CRISP1、Nus-CRISP3融合蛋白的Western blot鉴定 | 第39-40页 |
| ·GST-CRISP2融合蛋白的可溶性及包涵体分析 | 第40-41页 |
| ·GST-CRISP2融合蛋白的纯化与浓度测定 | 第41-42页 |
| 三、讨论 | 第42-43页 |
| 第三章 山羊CRISP2腹水多克隆抗体的制备及纯化 | 第43-53页 |
| 前言 | 第43-44页 |
| 一、材料和方法 | 第44-48页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-48页 |
| 二、结果 | 第48-52页 |
| ·小鼠抗绒山羊CRISP2多克隆抗体的鉴定与特异性分析 | 第48-50页 |
| ·小鼠抗山羊CRISP2多克隆抗体的效价测定 | 第50页 |
| ·小鼠抗绒山羊CRISP2多克隆抗体的纯化 | 第50-52页 |
| 三、讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 CRISP2在山羊睾丸组织和精子中的定位检测 | 第53-60页 |
| 前言 | 第53-54页 |
| 一、材料与方法 | 第54-57页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-57页 |
| 二、结果 | 第57-59页 |
| ·绒山羊睾丸和附睾组织中CRISP2的定位 | 第57-58页 |
| ·绒山羊精子中CRISP2的定位 | 第58-59页 |
| 三、讨论 | 第59-60页 |
| 第五章 绒山羊CRISP2与PDIA3相互作用的研究 | 第60-78页 |
| 前言 | 第60-62页 |
| 一、材料与方法 | 第62-70页 |
| ·材料 | 第62-64页 |
| ·实验方法 | 第64-70页 |
| 二、结果 | 第70-75页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第70-71页 |
| ·免疫共沉淀及Western blot结果 | 第71-73页 |
| ·酵母双杂交结果 | 第73-75页 |
| 三、讨论 | 第75-78页 |
| 第二部分 文献综述 | 第78-87页 |
| 1. CRISP蛋白的结构和功能特点 | 第78-82页 |
| 2. CRISP蛋白家族各成员 | 第82-86页 |
| ·附睾的CRISP1蛋白 | 第82-84页 |
| ·睾丸的CRISP2蛋白 | 第84-85页 |
| ·组织多样性的CRISP3蛋白 | 第85页 |
| ·附睾的CRISP4蛋白 | 第85-86页 |
| 3. 展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 读硕士期间参与的科研项目和发表的学术论文 | 第92页 |
| 1. 参加的研究项目 | 第92页 |
| 2. 发表的学术论文 | 第92页 |
