| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-28页 |
| ·引言 | 第11页 |
| ·包涵体及蛋白质复性 | 第11-18页 |
| ·包涵体的形成 | 第11-12页 |
| ·包涵体蛋白的分离、纯化及溶解 | 第12-13页 |
| ·蛋白质的体外复性方法 | 第13-16页 |
| ·稀释和透析复性 | 第14-15页 |
| ·层析折叠复性 | 第15-16页 |
| ·折叠促进剂协助复性 | 第16页 |
| ·两种蛋白质折叠学说 | 第16-18页 |
| ·折叠酶—DsbA | 第18-26页 |
| ·二硫键的形成 | 第19-20页 |
| ·Dsb家族蛋白及DsbA简介 | 第20-21页 |
| ·DsbA的结构 | 第21-22页 |
| ·DsbA的性质 | 第22-24页 |
| ·Dsb家族中各成员的协同作用 | 第24-25页 |
| ·DsbA协助蛋白质复性的研究 | 第25-26页 |
| ·本文的研究内容 | 第26-28页 |
| 第二章 质粒转化及菌种筛选 | 第28-34页 |
| ·实验材料和仪器 | 第28-31页 |
| ·质粒和宿主菌 | 第28-30页 |
| ·溶液 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·实验仪器 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-32页 |
| ·质粒抽提 | 第31页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·质粒的转化 | 第31-32页 |
| ·转化子筛选 | 第32页 |
| ·菌种保存 | 第32页 |
| ·实验结果及讨论 | 第32-33页 |
| ·菌种的筛选 | 第32页 |
| ·转化成功的检测 | 第32-33页 |
| ·本章小结 | 第33-34页 |
| 第三章 折叠酶DsbA在大肠杆菌中表达条件的统计优化 | 第34-44页 |
| ·实验材料和仪器 | 第34-35页 |
| ·菌种和试剂 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34-35页 |
| ·实验仪器 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-37页 |
| ·培养过程 | 第35页 |
| ·分析方法 | 第35-37页 |
| ·实验设计 | 第37-40页 |
| ·筛选实验——Plackett-Burman设计 | 第37-39页 |
| ·优化实验——杂合设计(Hybrid design) | 第39页 |
| ·验证实验 | 第39-40页 |
| ·数据处理法 | 第40-41页 |
| ·筛选实验的数据处理 | 第40页 |
| ·响应面的拟合与分析 | 第40-41页 |
| ·实验结果与讨论 | 第41-43页 |
| ·发酵中重要影响因素的确定 | 第41页 |
| ·发酵最佳操作点的确定 | 第41-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 折叠酶DsbA的纯化 | 第44-57页 |
| ·实验材料和方法 | 第44-45页 |
| ·缓冲溶液 | 第44页 |
| ·凝胶 | 第44页 |
| ·实验仪器 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-51页 |
| ·分析方法 | 第45-46页 |
| ·细胞破碎 | 第46页 |
| ·离子交换层析 | 第46-51页 |
| ·实验结果与讨论 | 第51-56页 |
| ·响应曲面的拟合 | 第51-54页 |
| ·最佳操作条件的确定 | 第54-55页 |
| ·优化后的验证实验 | 第55-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第五章 折叠酶DsbA协助溶菌酶体外复性初步研究 | 第57-76页 |
| ·实验材料和仪器 | 第57-58页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| ·缓冲液 | 第57-58页 |
| ·实验仪器 | 第58页 |
| ·分析方法 | 第58-61页 |
| ·RP-HPLC分离和测定蛋白质浓度 | 第58-60页 |
| ·溶菌酶活性测定方法(F.I.P.法) | 第60-61页 |
| ·实验设计与方法 | 第61-65页 |
| ·溶菌酶的变性处理 | 第61-62页 |
| ·筛选实验——Plackett-Burman设计 | 第62页 |
| ·重要因素考察实验 | 第62-63页 |
| ·DsbA的固定化方法 | 第63-65页 |
| ·DsbA半胱氨酸的可逆阻塞 | 第64-65页 |
| ·DsbA的固定化方法 | 第65页 |
| ·固定化DsbA协助溶菌酶复性 | 第65页 |
| ·数据处理 | 第65-66页 |
| ·实验结果与讨论 | 第66-75页 |
| ·影响溶菌酶复性过程的因素 | 第66-68页 |
| ·重要因素的筛选 | 第68-70页 |
| ·重要因素的考察 | 第70-74页 |
| ·DsbA介导体系与稀释复性结果比较 | 第74页 |
| ·DsbA固定化复性溶菌酶结果 | 第74-75页 |
| ·本章小结 | 第75-76页 |
| 第六章 结论与建议 | 第76-78页 |
| ·结论 | 第76页 |
| ·建议 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 致谢 | 第83页 |