| 目录 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 课题研究思路与技术路线 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-28页 |
| 1 IL-2的功能及其与IL-2R的重要关系 | 第14-16页 |
| ·IL-2的发现 | 第14-15页 |
| ·IL-2生物学功能及临床应用 | 第15-16页 |
| ·IL-2与IL-2R共同实现免疫调节作用 | 第16页 |
| 2 IL-2R研究进展 | 第16-21页 |
| ·IL-2R亚链的发现及其结构功能 | 第16-17页 |
| ·IL-2R亚链的细胞分布 | 第17-18页 |
| ·IL-R与IL-2动力学关系研究进展 | 第18-19页 |
| ·IL-2结合受体的位点 | 第18页 |
| ·IL-R亚链动力学关系 | 第18-19页 |
| ·IL-2R信号转导机理 | 第19-20页 |
| ·哺乳动物IL-2R的研究 | 第20页 |
| ·禽类IL-R研究进展 | 第20-21页 |
| 3 CD25+细胞与感染疾病发生有潜在联系 | 第21页 |
| 4 IL-2Rα细胞亚群 | 第21-24页 |
| 5 sIL-2Rα的重要生物学功能及研究进展 | 第24-25页 |
| ·sIL-2Rα的发现及来源 | 第24页 |
| ·sIL-2Rα理化及生物学特性 | 第24-25页 |
| ·sIL-2Rα在免疫调节中的作用 | 第25页 |
| 6 sIL-2Rα的检测方法的介绍及意义 | 第25-28页 |
| ·sIL-2Rα检测方法 | 第25-26页 |
| ·sIL-2R检测的临床意义 | 第26-28页 |
| 第二部分 研究内容 | 第28-59页 |
| 第一章 鸭CD25抗原捕获ELISA方法的建立 | 第28-45页 |
| 摘要 | 第28页 |
| 1 材料 | 第28-29页 |
| ·菌种 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·抗生素 | 第28页 |
| ·抗体 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-34页 |
| ·标准化鸭CD25蛋白的制备 | 第29页 |
| ·诱导表达 | 第29页 |
| ·duIL-2Rα的纯化 | 第29页 |
| ·抗鸭CD25单克隆抗体6F2株腹水的纯化 | 第29-30页 |
| ·兔抗鸭CD25 IgG的纯化 | 第30页 |
| ·BCA法测定重组鸭CD25及其抗体 | 第30-31页 |
| ·间接ELISA测定纯化后单抗腹水效价 | 第31页 |
| ·间接ELISA测定纯化后多抗腹水效价 | 第31页 |
| ·标准化后蛋白及抗体的SDS-PAGE和Western blot鉴定 | 第31-32页 |
| ·SDS-PAGE | 第31-32页 |
| ·Western blot鉴定 | 第32页 |
| ·抗原捕获ELISA最佳反应条件的优化 | 第32-34页 |
| ·最佳单抗包被浓度的确定 | 第32-33页 |
| ·最佳检测抗体浓度的确定 | 第33页 |
| ·最佳封闭液的选择 | 第33页 |
| ·抗原最佳反应时间的确定 | 第33页 |
| ·酶标抗体反应时间的确定 | 第33-34页 |
| ·试验方法的评价 | 第34页 |
| ·重复性 | 第34页 |
| ·灵敏度测定 | 第34页 |
| ·CV值计算 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-42页 |
| ·ELISA用抗体及蛋白的标准化 | 第34-36页 |
| ·纯化后抗原、抗体的SDS-PAGE和Western blot鉴定 | 第34-35页 |
| ·BCA法测定标准蛋白浓度及抗体浓度和效价 | 第35-36页 |
| ·抗原捕获ELISA最佳反应条件的优化 | 第36-42页 |
| ·最佳单抗包被浓度的确定 | 第36-39页 |
| ·最佳多抗浓度的确定 | 第39页 |
| ·最佳封闭液的选择 | 第39-40页 |
| ·最佳抗原反应时间的选择 | 第40页 |
| ·最佳酶标抗体反应时间的选择 | 第40页 |
| ·最佳显色时间的选择 | 第40-41页 |
| ·试验方法可重复性和灵敏度 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-45页 |
| 第二章 可溶性CD25的检测及CD25表型细胞分析 | 第45-59页 |
| 摘要 | 第45页 |
| 1 材料 | 第45-46页 |
| ·病原 | 第45页 |
| ·动物 | 第45页 |
| ·RPMI1640完全培养基 | 第45-46页 |
| ·常用缓冲液 | 第46页 |
| ·抗体 | 第46页 |
| ·仪器 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-50页 |
| ·鸭外周血单核细胞的分离 | 第46-47页 |
| ·常规外周血单核细胞分离 | 第46页 |
| ·小剂量(1ml)鸭外周血单核细胞分离方法探索 | 第46-47页 |
| ·外周血单核细胞体外培养上清中的CD25测定 | 第47页 |
| ·可溶性CD25与膜结合CD25分子相关性检测 | 第47-48页 |
| ·外周血单核细胞体外培养及多抗标记方案 | 第47-48页 |
| ·动物感染 | 第48-49页 |
| ·H9N2感染方案 | 第48页 |
| ·H5N1感染方案 | 第48-49页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌感染方案 | 第49页 |
| ·细菌准备 | 第49页 |
| ·细菌感染方案 | 第49页 |
| ·可溶性CD25检测及标准曲线的绘制 | 第49-50页 |
| ·体外培养单核细胞中抗鸭CD25多抗标记物检测 | 第50页 |
| ·多种病原感染状态下外周血CD25~+细胞分析 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-56页 |
| ·小剂量鸭外周血单核细胞的分离方法建立 | 第50-51页 |
| ·体外培养鸭单核细胞上清中可溶性CD25的动态 | 第51页 |
| ·可溶性CD25与膜结合CD25分了相关性验证 | 第51-52页 |
| ·病原感染状态下鸭血清中可溶性CD25的动态变化 | 第52-53页 |
| ·病原感染状态下鸭外周血单核细胞中CD25表型细胞的动态变化 | 第53-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| 参考文献 | 第59-68页 |
| 附录 常用缓冲液及培养基配方 | 第68-73页 |
| 攻读硕士期间的科研成果 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
