| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 综述 | 第8-12页 |
| 1 细菌产生抗生素耐药性的机理 | 第8-9页 |
| 2 已知功能的RNA耐药型甲基转移酶 | 第9-10页 |
| ·红霉素耐药性RNA甲基转移酶 | 第9页 |
| ·卑霉素耐药性RNA甲基转移酶 | 第9页 |
| ·rRNA Gm2270甲基转移酶 | 第9-10页 |
| 3 含硫多肽类抗生素及其耐药性产生机理 | 第10页 |
| 4 RNA甲基化的检测方法 | 第10-12页 |
| ·引物延伸法 | 第11页 |
| ·同位素标记后通过液闪仪检测 | 第11页 |
| ·高效液相色谱与质谱联用 | 第11-12页 |
| 第二章 TSR、NHR的克隆、表达与纯化以及核糖体RNA底物的体外合成 | 第12-31页 |
| 1 材料 | 第13-15页 |
| ·仪器 | 第13-14页 |
| ·试剂 | 第14页 |
| ·质粒与菌株 | 第14页 |
| ·培养基及缓冲液 | 第14-15页 |
| 2 方法 | 第15-25页 |
| ·TSR、NHR的克隆 | 第15-20页 |
| ·PCR扩增TSR、NHR相应基因片段 | 第16-17页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第17-18页 |
| ·PCR产物酶切 | 第18页 |
| ·载体与DNA片段连接 | 第18-19页 |
| ·转化及筛选 | 第19-20页 |
| ·TSR、NHR蛋白表达及纯化 | 第20页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第20-21页 |
| ·核糖体RNA底物的体外合成 | 第21-25页 |
| ·核糖体RNA底物的序列及DNA模板 | 第21-24页 |
| ·核糖体RNA底物体外转录及透析纯化 | 第24-25页 |
| 3 结果 | 第25-29页 |
| ·TSR、NHR的克隆 | 第25-26页 |
| ·TSR、NHR蛋白表达及纯化 | 第26页 |
| ·两步法PCR扩增58bp RNA底物DNA模板 | 第26-27页 |
| ·NHR与TSR比对结果及NHR蛋白的三维结构总览 | 第27-29页 |
| 4 本章小结 | 第29-31页 |
| 第三章 TSR、NHR的甲基转移酶活性 | 第31-45页 |
| 1 材料 | 第31页 |
| ·仪器 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·缓冲液 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-34页 |
| ·TSR及NHR蛋白最佳反应条件 | 第31-32页 |
| ·甲基化位点A1067位突变研究 | 第32-33页 |
| ·TSR、NHR蛋白对RNA底物的浓度依赖性 | 第33页 |
| ·NHR蛋白突变体的甲基化能力 | 第33-34页 |
| ·NHR蛋白的突变位点 | 第33页 |
| ·NHR蛋白突变体的甲基转移酶活性测定 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-43页 |
| ·TSR及NHR蛋白最佳反应条件 | 第34-35页 |
| ·甲基化位点A1067位突变研究 | 第35-36页 |
| ·TSR、NHR蛋白对RNA底物的浓度依赖性 | 第36-37页 |
| ·NHR蛋白突变体的甲基化能力 | 第37-43页 |
| ·NHR蛋白的SAM结合位点 | 第37-39页 |
| ·NHR蛋白的二聚体界面 | 第39-41页 |
| ·NHR蛋白N-端RNA结合结构域 | 第41-43页 |
| 4 本章小结 | 第43-45页 |
| 第四章 TSR、NHR蛋白与底物RNA的相互作用 | 第45-53页 |
| 1 材料 | 第45页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45页 |
| ·缓冲液 | 第45页 |
| 2 方法 | 第45-49页 |
| ·Gel shift检测TSR、NHR蛋白与RNA底物体外相互作用 | 第45-46页 |
| ·Gel shift检测SAM对TSR、NHR蛋白与RNA底物体外相互作用的影响 | 第46页 |
| ·TSR、NHR蛋白与RNA底物的亲和力测定 | 第46-49页 |
| ·RNA底物末端标记FTSC | 第47-48页 |
| ·TSR、NHR蛋白与RNA底物的亲和力测定 | 第48-49页 |
| 3 结果 | 第49-52页 |
| ·Gel shift检测TSR、NHR蛋白与RNA底物体外相互作用 | 第49-50页 |
| ·Gel shift检测SAM对TSR、NHR蛋白与RNA底物体外相互作用的影响 | 第50页 |
| ·TSR、NHR蛋白与RNA底物的亲和力测定 | 第50-52页 |
| 4 本章小结 | 第52-53页 |
| 全文总结与展望 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
