| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第8-23页 |
| ·Myostatin 基因概况 | 第8-13页 |
| ·Myostatin 基因的发现 | 第8-9页 |
| ·Myostatin 基因的结构 | 第9页 |
| ·Myostatin 基因的保守性 | 第9页 |
| ·Myostatin 基因表达研究 | 第9-10页 |
| ·Myostatin 基因的生物学功能 | 第10-12页 |
| ·Myostatin 基因的应用前景 | 第12-13页 |
| ·基因打靶技术 | 第13-17页 |
| ·基因打靶技术的概念 | 第13页 |
| ·基因打靶载体类型 | 第13-15页 |
| ·实现基因敲除的途径 | 第15-16页 |
| ·基因敲除技术的应用 | 第16-17页 |
| ·转基因动物 | 第17-22页 |
| ·外源基因导入受体细胞方法 | 第17-19页 |
| ·转染细胞的筛选方法 | 第19-20页 |
| ·体细胞核移植的研究 | 第20-21页 |
| ·转基因猪的研究概况及其应用前景 | 第21-22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-40页 |
| ·实验材料 | 第23-27页 |
| ·主要器材 | 第23-24页 |
| ·主要药品及配制 | 第24-26页 |
| ·DNA 分析软件与网址 | 第26-27页 |
| ·实验动物 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-40页 |
| ·大白猪成纤维细胞体外培养体系的建立 | 第27-30页 |
| ·Myostatin 转染质粒的准备 | 第30-33页 |
| ·打靶载体转染大白猪胎儿成纤维细胞 | 第33-38页 |
| ·阳性细胞核移植的体外发育 | 第38-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-58页 |
| ·细胞培养的结果 | 第40-44页 |
| ·胰酶消化法大白猪胎儿成纤维细胞的培养 | 第40页 |
| ·组织块法大白猪胎儿成纤维细胞的培养 | 第40页 |
| ·细胞的冻存和复苏 | 第40-43页 |
| ·大白猪胎儿成纤维细胞的生长曲线 | 第43页 |
| ·大白猪胎儿成纤维细胞的核型分析 | 第43-44页 |
| ·转染质粒扩繁结果 | 第44-45页 |
| ·无内毒素质粒的提取 | 第44页 |
| ·质粒的酶切鉴定结果 | 第44-45页 |
| ·线性化载体的纯化 | 第45页 |
| ·转染的结果 | 第45-58页 |
| ·G418 筛选浓度的选择结果 | 第45-46页 |
| ·转染条件的优化 | 第46-49页 |
| ·细胞筛选结果 | 第49-52页 |
| ·阳性细胞核型分析结果 | 第52页 |
| ·阳性细胞DNA 提取结果 | 第52-53页 |
| ·阳性细胞PCR 检测结果 | 第53页 |
| ·转染前细胞内RNA 提取结果 | 第53页 |
| ·阳性细胞RNA 提取结果 | 第53-54页 |
| ·转染前后细胞中Myostatin 基因表达量的差异 | 第54-56页 |
| ·重构胚在体外发育情况 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-62页 |
| ·细胞供体的年龄的选择 | 第58页 |
| ·细胞培养体系的建立 | 第58页 |
| ·细胞的分离纯化 | 第58-59页 |
| ·转染方法 | 第59页 |
| ·打靶载体的选择 | 第59页 |
| ·G418 筛选浓度的选择 | 第59页 |
| ·关于GANC 筛选 | 第59-60页 |
| ·关于筛选后阳性细胞的培养 | 第60页 |
| ·关于阳性细胞核型 | 第60页 |
| ·关于阳性细胞的鉴定 | 第60页 |
| ·转染前后 Myostatin 基因表达的检测 | 第60-61页 |
| ·核移植 | 第61-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第69页 |