| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述及研究目的与意义 | 第11-23页 |
| 1、植物萜类化合物生物合成的特点 | 第11-12页 |
| 2、萜类化合物的生物合成途径 | 第12-14页 |
| ·细胞质中的MVA 途径 | 第12-13页 |
| ·质体中的DXP 途径 | 第13-14页 |
| 3、单萜和倍半萜合成酶 | 第14-18页 |
| 4、萜类化合物合成的调控 | 第18-20页 |
| ·植物萜类合成酶相关基因的空间差异表达 | 第19页 |
| ·植物萜类合成酶相关基因的时间差异表达 | 第19-20页 |
| ·植物萜类合成酶相关基因的受环境因子胁迫影响的表达 | 第20页 |
| 5、柠檬烯和Β-石竹烯合成酶及其主要产物的生物学功能 | 第20-21页 |
| 6、本文的研究目的与意义 | 第21-23页 |
| 第二章 水稻OSCAS 基因克隆鉴定、原核表达及其遗传转化 | 第23-50页 |
| 1、材料与方法 | 第23-40页 |
| ·水稻品种和虫源 | 第23-24页 |
| ·菌株、酶、载体及试剂 | 第24页 |
| ·水稻处理 | 第24页 |
| ·水稻OsCAS 基因克隆及鉴定 | 第24-30页 |
| ·水稻总RNA 的提取 | 第24-25页 |
| ·琼脂糖凝胶甲醛变性电泳 | 第25页 |
| ·水稻cDNA 第一链合成 | 第25-26页 |
| ·目的片段cDNA 的扩增及PCR 产物的纯化 | 第26-27页 |
| 1）目的片段的扩增 | 第26-27页 |
| 2）PCR 产物的纯化 | 第27页 |
| ·目的片段与T 载体的连接、转化与测序 | 第27-30页 |
| 1）连接 | 第27-28页 |
| 2）大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 3）重组质粒大肠杆菌转化 | 第28-29页 |
| 4）重组质粒提取、酶切鉴定及目的片段测序 | 第29-30页 |
| ·水稻OsCAS 基因的原核表达 | 第30-33页 |
| ·融合表达载体pET32a(+）-OsCAS 的构建 | 第30-32页 |
| 1）目的基因ORF 的扩增、鉴定与PCR 的产物纯化 | 第30页 |
| 2）pET32a(+）质粒的提取 | 第30-31页 |
| 3）目的片段与表达载体pET32a(+）的连接 | 第31页 |
| 4）融合表达载体的转化与鉴定 | 第31-32页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第32页 |
| ·融合蛋白的SDS—PAGE 检测 | 第32-33页 |
| 1）分离胶和浓缩胶的的制备 | 第32-33页 |
| 2）SDS-PAGE 检测 | 第33页 |
| ·水稻OsCAS 基因的诱导表达特征分析 | 第33-34页 |
| ·Northern 杂交 | 第34-35页 |
| ·Northern 转膜 | 第34页 |
| ·预杂交 | 第34-35页 |
| ·杂交 | 第35页 |
| ·洗膜 | 第35页 |
| ·显影 | 第35页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化和转基因植株再生 | 第35-40页 |
| ·过量表达载体和RNAi 载体的构建 | 第35-37页 |
| 1）目的片段的扩增、鉴定及PCR 产物纯化 | 第36页 |
| 2）目的片段与PCAMBIA1301 载体、pMECE 载体的连接及转化 | 第36-37页 |
| 3）重组质粒pCAMBIA1301-OsCAS 和pMECE-OsCASRL 的酶切与鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒pCAMBIA1301-OsCAS 和pMECE-OsCASRL 农杆菌的转化 | 第37-38页 |
| 1）农杆菌感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| 2）重组质粒农杆菌转化 | 第38页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第38-40页 |
| 1）水稻成熟胚愈伤组织的诱导 | 第38页 |
| 2）用于转化含目的外源基因的农杆菌的制备 | 第38-39页 |
| 3）水稻愈伤与农杆菌的共培养 | 第39页 |
| 4）抗性愈伤组织的筛选 | 第39页 |
| 5）抗性愈伤组织的预分化培养 | 第39-40页 |
| 6）抗性愈伤组织的分化培养 | 第40页 |
| 7）转基因幼苗的生根培养与炼苗 | 第40页 |
| ·转基因水稻苗的移栽 | 第40页 |
| 2、结果与分析 | 第40-48页 |
| ·目的基因cDNA 的克隆及鉴定 | 第40-41页 |
| ·β-石竹烯合成酶基因进化树分析 | 第41-42页 |
| ·水稻OsCAS 基因的原核表达 | 第42-43页 |
| ·水稻OsCAS 基因的诱导表达特征分析 | 第43-44页 |
| ·水稻OsCAS 基因的遗传转化及转基因品系的获得 | 第44-48页 |
| ·重组质粒pCAMBIA1301-OsCAS 和pMECE-OsCASRL 鉴定 | 第44-47页 |
| 1） 重组质粒pCAMBIA1301-OsCAS 鉴定 | 第44-45页 |
| 2） 重组质粒pMECE-OsCASR 和pMECE-OsCASRL 鉴定 | 第45-47页 |
| ·转基因水稻品系的获得 | 第47-48页 |
| 3、讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 水稻OSLIMS 基因克隆鉴定、原核表达及其遗传转化 | 第50-64页 |
| 1、材料与方法 | 第50-55页 |
| ·水稻品种和虫源 | 第50页 |
| ·菌株、酶、载体及试剂 | 第50-51页 |
| ·水稻处理 | 第51页 |
| ·水稻OsLIMS 基因的克隆及鉴定 | 第51-52页 |
| ·水稻总RNA 的提取及电泳 | 第51页 |
| ·琼脂糖凝胶甲醛变性电泳 | 第51页 |
| ·水稻cDNA 第一链合成 | 第51页 |
| ·目的片段的扩增及PCR 产物的纯化 | 第51-52页 |
| 1）目的片段的扩增 | 第51-52页 |
| 2）PCR 产物的纯化 | 第52页 |
| ·目的片段与T 载体的连接、转化与测序 | 第52页 |
| ·水稻OsLIMS 基因的原核表达 | 第52-53页 |
| ·融合表达载体pET32a(+）-OsLIMS 的构建 | 第52-53页 |
| 1）目的基因ORF 的扩增、鉴定及PCR 产物纯化 | 第52页 |
| 2）pET32a(+）质粒的提取 | 第52-53页 |
| 3） 目的片段与表达载体pET32a(+）的连接 | 第53页 |
| 4） 融合表达载体的转化及鉴定 | 第53页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第53页 |
| ·融合蛋白的SDS-PAGE 检测 | 第53页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化和转基因植株再生 | 第53-55页 |
| ·过量表达载体和RNAi 载体的构建 | 第53-55页 |
| 1）目的片段的扩增、鉴定及PCR 产物的纯化 | 第53-54页 |
| 2）目的片段与pCAMBIA1301 载体和pMECE 载体的连接及转化 | 第54页 |
| 3）重组质粒pCAMBIA1301-OsLIMS 和pMECE-OsLIMSRL 的酶切及鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组质粒pCAMBIA1301-OsLIMS 和pMECE-OsLIMSRL 农杆菌的转化 | 第55页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第55页 |
| ·转基因水稻苗的移栽 | 第55页 |
| 2、结果与分析 | 第55-63页 |
| ·目的基因cDNA 的克隆及鉴定 | 第55-56页 |
| ·柠檬烯合成酶基因进化树分析 | 第56-57页 |
| ·水稻OsLIMS 基因的原核表达 | 第57-59页 |
| ·水稻OsLIMS 基因的遗传转化及转基因品系的获得 | 第59-63页 |
| ·重组质粒pCAMNBIA1301-OsLIMS 和pMECE-OsLIMSRL 鉴定 | 第59-61页 |
| 1） 重组质粒pCAMNBIA1301-OsLIMS 鉴定 | 第59-60页 |
| 2） 重组质粒pMECE-OsLIMSR 和pMECE-OsLIMSRL 鉴定 | 第60-61页 |
| ·转基因水稻品系的获得 | 第61-63页 |
| 3、讨论 | 第63-64页 |
| 第四章 本研究的创新点及今后应努力的方向 | 第64-65页 |
| 1、本研究的创新点 | 第64页 |
| 2、今后应努力的方向 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-75页 |
| 附录 | 第75-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
