| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 引言 | 第9-14页 |
| 第一部分 Pro-Q Diamond染色方法评价 | 第14-22页 |
| 1 材料与仪器 | 第14-15页 |
| ·材料 | 第14页 |
| ·仪器 | 第14-15页 |
| 2 实验方法 | 第15-16页 |
| ·碱性磷酸酶处理磷酸化蛋白质 | 第15页 |
| ·SDS-PAGE | 第15页 |
| ·染色 | 第15-16页 |
| ·凝胶扫描 | 第16页 |
| ·图像分析 | 第16页 |
| 3 结果与讨论 | 第16-21页 |
| ·Pro-Q Diamond检测磷酸化蛋白质的灵敏度考察 | 第16-17页 |
| ·Pro-Q Diamond检测磷酸化蛋白质的线性范围考察 | 第17-18页 |
| ·荧光染色方法检测磷酸化蛋白质的特异性实验 | 第18-21页 |
| 4 本章小结 | 第21-22页 |
| 第二部分 荧光染色法检测正常人肝细胞(Chang's cell)的磷酸化蛋白质谱 | 第22-36页 |
| 1 材料与仪器 | 第22-23页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·仪器 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-25页 |
| ·细胞蛋白质提取 | 第23页 |
| ·蛋白定量 | 第23页 |
| ·二维电泳(2-DE) | 第23-24页 |
| ·磷酸化蛋白质及总蛋白质染色 | 第24页 |
| ·图像分析 | 第24页 |
| ·胶内酶解 | 第24-25页 |
| ·质谱鉴定 | 第25页 |
| 3 结果与讨论 | 第25-35页 |
| ·点靶方式优化 | 第25页 |
| ·Pro-Q Diamond染料的动态范围测定 | 第25-27页 |
| ·磷酸化蛋白质多态性分析 | 第27-29页 |
| ·蛋白质的磷酸化水平分析 | 第29-31页 |
| ·磷酸化蛋白质的功能分析 | 第31-35页 |
| 4 本章小结 | 第35-36页 |
| 第三部分 荧光染色法与荧光差示凝胶电泳结合进行信号网络中磷酸化蛋白质的动态观测 | 第36-56页 |
| 第一节 差示蛋白质的分析 | 第38-49页 |
| 1 材料与仪器 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·仪器及软件 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-40页 |
| ·样品准备 | 第38页 |
| ·蛋白定量 | 第38页 |
| ·2-D DIGE实验设计 | 第38-39页 |
| ·CyDye标记 | 第39页 |
| ·二维电泳(2-DE) | 第39页 |
| ·凝胶扫描 | 第39-40页 |
| 3 结果与讨论 | 第40-49页 |
| ·蛋白定量结果的准确性验证 | 第40页 |
| ·2-D DIGE重现性分析 | 第40-42页 |
| ·2-D DIGE与Pro-Q Diamond染色相结合的方法考察 | 第42-47页 |
| ·Pro-Q Diamond染色检测磷酸化蛋白质 | 第47页 |
| ·差异蛋白质点的分析 | 第47-49页 |
| 第二节 差异蛋白质的鉴定 | 第49-56页 |
| 1 材料与仪器 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·仪器 | 第49页 |
| 2 实验方法 | 第49-50页 |
| ·制备胶 | 第49页 |
| ·胶内酶解 | 第49页 |
| ·MALDI-TOF/TOF MS | 第49-50页 |
| 3 结果与讨论 | 第50-55页 |
| ·鉴定结果 | 第50页 |
| ·功能分析 | 第50-55页 |
| 4 本章小结 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 综述 | 第64-71页 |
