| 中文摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-19页 |
| ·豆豉溶栓酶的溶栓机制 | 第11-12页 |
| ·豆豉溶栓酶的菌种 | 第12页 |
| ·豆豉溶栓酶的分离纯化 | 第12-15页 |
| ·豆豉溶栓酶的理化性质 | 第15页 |
| ·酶的分子量 | 第15页 |
| ·酶的等电点 | 第15页 |
| ·酶的稳定性 | 第15页 |
| ·酰胺水解酶活性 | 第15页 |
| ·豆豉溶栓酶基因的克隆和表达 | 第15-17页 |
| ·豆豉溶栓酶的功能实验 | 第17页 |
| ·体外溶血作用 | 第17页 |
| ·对体外凝血时间(CT)和优球蛋白溶解时间(ELT)的影响 | 第17页 |
| ·体内抗栓、溶栓作用 | 第17页 |
| ·本项实验的研究意义及应用前景 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-26页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·菌株 | 第19页 |
| ·试剂 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-26页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·溶栓酶的分离纯化 | 第19-20页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第20页 |
| ·溶栓酶活性测定 | 第20页 |
| ·酶活标准曲线制作 | 第20页 |
| ·四肽底物法测酶活 | 第20页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第20页 |
| ·溶栓酶性质的研究 | 第20页 |
| ·豆豉溶栓酶成熟肽编码区的PCR扩增和克隆 | 第20-24页 |
| ·枯草芽孢杆菌基因组的提取 | 第20-21页 |
| ·PCR反应 | 第21-22页 |
| ·PCR产物胶回收 | 第22页 |
| ·PCR产物与T载体连接 | 第22页 |
| ·感受态的制备 | 第22-23页 |
| ·转化 | 第23页 |
| ·SDS碱裂解法提取质粒 | 第23-24页 |
| ·目的基因的双酶切 | 第24页 |
| ·双酶切DNA片段与表达载体连接 | 第24页 |
| ·蛋白质表达与转化 | 第24-25页 |
| ·蛋白质的表达 | 第24-25页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第25页 |
| ·SDS-PAGE | 第25页 |
| ·溶栓酶功能试验 | 第25-26页 |
| ·体外抗凝血试验 | 第25页 |
| ·溶栓试验 | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-40页 |
| ·枯草芽孢杆菌溶栓酶的分离与纯化 | 第26-29页 |
| ·枯草芽孢杆菌溶栓酶的纯化 | 第26页 |
| ·溶栓酶活力的标准曲线 | 第26-27页 |
| ·溶栓酶蛋白质浓度的标准曲线 | 第27-28页 |
| ·SEPHADEX-G100柱层析分离纯化溶栓酶 | 第28-29页 |
| ·溶栓酶的理化性质 | 第29-33页 |
| ·最适温度 | 第29页 |
| ·热稳定性 | 第29页 |
| ·最适PH | 第29-30页 |
| ·PH稳定性 | 第30页 |
| ·金属离子的影响 | 第30页 |
| ·有机溶剂影响 | 第30-33页 |
| ·甲醇对溶栓酶的影响 | 第31页 |
| ·乙醇对溶栓酶的影响 | 第31-32页 |
| ·异丙醇对溶栓酶的影响 | 第32-33页 |
| ·溶栓酶基因的克隆和表达 | 第33-38页 |
| ·PCR扩增溶栓酶基因的结果 | 第33页 |
| ·PMD18-T-DFE载体的构建 | 第33-35页 |
| ·序列测定和同源性比对 | 第35-36页 |
| ·序列测定 | 第35页 |
| ·同源性比对 | 第35-36页 |
| ·PET32A-DFE表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·目的蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第37-38页 |
| ·溶栓酶功能测定 | 第38-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 5 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 附录 | 第46-49页 |
| 致谢 | 第49页 |