| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩略词表 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-26页 |
| ·黄曲霉毒素的简介 | 第12-15页 |
| ·黄曲霉毒素的理化特性 | 第12-13页 |
| ·黄曲霉毒素的生物合成 | 第13-14页 |
| ·黄曲霉毒素的危害 | 第14-15页 |
| ·黄曲霉毒素去毒化的研究进展 | 第15-17页 |
| ·物理化学去毒 | 第15页 |
| ·生物学去毒 | 第15-17页 |
| ·添加微生物菌体制剂 | 第15-16页 |
| ·酶法去毒 | 第16-17页 |
| ·大肠杆菌原核表达系统 | 第17-22页 |
| ·新生肽折叠与包涵体的形成 | 第17-19页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达策略 | 第19-22页 |
| ·分子伴侣的使用 | 第19-20页 |
| ·融合蛋白的应用 | 第20页 |
| ·折叠酶的共表达 | 第20-21页 |
| ·优化培养及表达条件 | 第21页 |
| ·选择适合的菌株 | 第21-22页 |
| ·化学物质的加入 | 第22页 |
| ·氨基酸的替代 | 第22页 |
| ·pMAL~(TM)蛋白质融合与纯化系统 | 第22-23页 |
| ·圆二色谱在结构生物学研究中的应用 | 第23-25页 |
| ·研究背景与思路 | 第25-26页 |
| 第二章 实验设备及材料 | 第26-32页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| ·实验材料 | 第26-32页 |
| ·菌种与质粒 | 第26-27页 |
| ·酶类 | 第27页 |
| ·试剂盒 | 第27页 |
| ·分子量参照物 | 第27页 |
| ·常用试剂 | 第27-28页 |
| ·培养基&其他试剂 | 第28-32页 |
| 第三章 实验方法 | 第32-50页 |
| ·pMAL—C2X—ADTZ重组质粒的构建、转化与表达 | 第32-45页 |
| ·目的片段ADTZ与载体pMAL—C2X的制备 | 第32-36页 |
| ·扩增提取含有目的基因的质粒 | 第32页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第32-33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物 | 第33-34页 |
| ·DNA快速回收试剂盒回收PCR产物 | 第34页 |
| ·单酶切PCR产物 | 第34-35页 |
| ·扩增提取载体质粒pMAL-C2X | 第35页 |
| ·分步单酶切载体pMAL—C2X | 第35-36页 |
| ·XmnI单酶切载体pMAL—C2X | 第35-36页 |
| ·BamHI单酶切载体pMAL—C2X片段 | 第36页 |
| ·重组质粒pMAL—C2X—ADTZ的构建及克隆 | 第36-39页 |
| ·载体pMAL—C2X与ADTZ片段的连接 | 第36页 |
| ·TOP10F’感受态细胞的制备、转化 | 第36-37页 |
| ·PCR和双酶切鉴定重组质粒pMAL—C2X—ADTZ | 第37-39页 |
| ·重组质粒测序 | 第39页 |
| ·pMAL—C2X—ADTZ重组质粒转化Rosetta(DE3) | 第39-41页 |
| ·Rosetta(DE3)感受态细胞的制备、转化 | 第39-40页 |
| ·菌落PCR鉴定Rosetta(DE3)—pMAL—C2X—ADTZ重组子 | 第40-41页 |
| ·MBP_ADTZ融合蛋白的诱导表达 | 第41-45页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE检测表达产物 | 第42页 |
| ·MBP_ADTZ融合蛋白的可溶性分析 | 第42-43页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第43-44页 |
| ·表达条件优化 | 第44-45页 |
| ·诱导温度的探索 | 第44页 |
| ·IPTG浓度的探索 | 第44页 |
| ·IPTG加入时机的探索 | 第44页 |
| ·诱导时间的探索 | 第44-45页 |
| ·MBP_ADTZ融合蛋白的Western blot分析 | 第45页 |
| ·MBP_ADTZ融合蛋白的亲和层析 | 第45-46页 |
| ·MBP_ADTZ融合蛋白的酶切 | 第46-47页 |
| ·1%(质量比)Factor Xa酶切MBP_ADTZ融合蛋白的时间选择 | 第46页 |
| ·Factor Xa酶切MBP_ADTZ融合蛋白最佳浓度的选择 | 第46-47页 |
| ·酶切产物的柱层析分离纯化 | 第47页 |
| ·酶切产物的DEAE柱层析 | 第47页 |
| ·酶切产物的G—75柱层析 | 第47页 |
| ·酶切产物的Phenyl Sepharose 6 Fast Flow疏水柱层析 | 第47页 |
| ·rADTZ生物活性的测定 | 第47-49页 |
| ·AFB_1高效薄层层析(HPTLC)检测法 | 第47-48页 |
| ·AFB_1荧光扫描法 | 第48-49页 |
| ·rADTZ的圆二色性分析 | 第49-50页 |
| 第四章 实验结果 | 第50-71页 |
| ·pMAL—C2X—ADTZ重组质粒的构建、转化与表达 | 第50-61页 |
| ·PCR扩增目的基因和单酶切载体pMAL—C2X | 第50页 |
| ·BamHI单酶切ADTZ片段和pMAL—C2X片段 | 第50-51页 |
| ·重组质粒pMAL—C2X—ADTZ的PCR和酶切鉴定 | 第51-52页 |
| ·TOP10F'—pMAL—C2X—ADTZ测序结果 | 第52-53页 |
| ·TOP10F'—pMAL—C2X—ADTZ的测序结果去除载体序列分析 | 第53-54页 |
| ·菌落PCR鉴定Rosetta(DE3)—pMAL—C2X—ADTZ重组子 | 第54页 |
| ·MBP_ADTZ融合蛋白的诱导表达结果 | 第54-55页 |
| ·MBP_ADTZ融合蛋白的可溶性分析 | 第55-56页 |
| ·MBP ADTZ融合蛋白在Rosetta(DE3)中表达条件的优化 | 第56-61页 |
| ·最佳诱导温度的选择 | 第56-57页 |
| ·IPTG浓度的选择 | 第57-58页 |
| ·IPTG加入时机的选择 | 第58-60页 |
| ·不同的诱导时间 | 第60-61页 |
| ·Western blot鉴定融合蛋白MBP ADTZ | 第61-62页 |
| ·MBP_ADTZ融合蛋白亲和层析纯化结果 | 第62-63页 |
| ·MBP_ADTZ融合蛋白的酶切结果 | 第63-64页 |
| ·1%(质量比)Factor Xa酶切MBP_ADTZ融合蛋白的时间选择结果 | 第63-64页 |
| ·Factor Xa酶切MBP_ADTZ融合蛋白最佳浓度选择结果 | 第64页 |
| ·酶切产物的柱层析分离纯化 | 第64-68页 |
| ·酶切产物的DEAE柱层析结果 | 第64-65页 |
| ·酶切产物的G—75柱层析结果 | 第65-66页 |
| ·酶切产物的Phenyl Sepharose 6 Fast Flow疏水柱层析结果 | 第66-68页 |
| ·rADTZ生物活性的测定结果 | 第68-69页 |
| ·AFB_1高效薄层层析(HFTLC)检测结果 | 第68-69页 |
| ·AFB_1荧光扫描结果 | 第69页 |
| ·rADTZ的圆二色性分析结果 | 第69-71页 |
| 第五章 分析与讨论 | 第71-75页 |
| ·pMAL—C2X载体表达系统的特点 | 第71页 |
| ·MBP_ADTZ融合蛋白在Rosetta(DE3)中表达条件的优化 | 第71-73页 |
| ·酶切产物的柱层析分离纯化 | 第73-74页 |
| ·rADTZ蛋白的生物学活性检测及圆二色性分析 | 第74-75页 |
| 第六章 小结与展望 | 第75-76页 |
| 附录1 | 第76-77页 |
| 附录2 | 第77-79页 |
| 附录3 | 第79-81页 |
| 附录4 | 第81-84页 |
| 参考文献 | 第84-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
