| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-20页 |
| ·课题背景 | 第10-12页 |
| ·能源短缺已成为影响国家安全的战略因素 | 第10页 |
| ·发展燃料乙醇的意义 | 第10-11页 |
| ·发展纤维素燃料乙醇的战略意义 | 第11-12页 |
| ·纤维素燃料乙醇的发展历史和存在的问题 | 第12-14页 |
| ·木糖转化制乙醇的研究进展 | 第14-15页 |
| ·研究现状分析 | 第14页 |
| ·自然界中发酵木糖的微生物 | 第14-15页 |
| ·木糖代谢基因工程菌研究概况 | 第15-18页 |
| ·木糖代谢途径 | 第15页 |
| ·木糖代谢工程菌的构建 | 第15-18页 |
| ·课题的研究意义与内容 | 第18-20页 |
| 第2章 木糖代谢途径中关键酶基因XYL1 的获得 | 第20-33页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·菌株和载体 | 第20页 |
| ·试剂、培养基和仪器 | 第20-22页 |
| ·木糖还原酶基因序列的获取 | 第22-26页 |
| ·3'RACE 引物设计 | 第22-23页 |
| ·细胞培养及Total RNA 的提取 | 第23页 |
| ·3'RACE 实验 | 第23-24页 |
| ·目的片段的克隆 | 第24-25页 |
| ·5'RACE 引物设计 | 第25页 |
| ·5'RACE 实验 | 第25-26页 |
| ·XYL1 基因全序列的获得与克隆 | 第26页 |
| ·DNA 序列比较分析和系统树构建 | 第26-28页 |
| ·实验结果 | 第28-32页 |
| ·近平滑假丝酵母Total RNA 的提取 | 第28页 |
| ·3'RACE 和5'RACE 实验的结果 | 第28-30页 |
| ·XYL1 基因全序列的获得和开放阅读框的克隆 | 第30-31页 |
| ·进化关系分析 | 第31-32页 |
| ·本章小结 | 第32-33页 |
| 第3章 木糖还原酶基因的亚克隆与表达 | 第33-47页 |
| ·实验材料 | 第34-36页 |
| ·菌株和载体 | 第34页 |
| ·试剂、培养基和仪器 | 第34-36页 |
| ·木糖还原酶基因的亚克隆 | 第36-38页 |
| ·限制性酶切反应 | 第36-37页 |
| ·片段与载体连接 | 第37页 |
| ·大肠杆菌转化与阳性克隆筛选 | 第37-38页 |
| ·毕赤酵母转化 | 第38-40页 |
| ·毕赤酵母感受态的制备 | 第38-39页 |
| ·毕赤酵母转化 | 第39-40页 |
| ·菌体的培养及重组蛋白表达 | 第40-42页 |
| ·菌体培养 | 第40-41页 |
| ·蛋白质沉淀 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第41-42页 |
| ·考马斯亮蓝染色及脱色 | 第42页 |
| ·实验结果 | 第42-46页 |
| ·载体和连接片段的制备 | 第42页 |
| ·大肠杆菌阳性克隆筛选及酶切鉴定 | 第42-44页 |
| ·重组毕赤酵母基因组DNA 的提取及阳性克隆的筛选 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第45-46页 |
| ·本章小结 | 第46-47页 |
| 第4章 蛋白Western Blot 与木糖还原酶活性的研究 | 第47-52页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·Western Blot 缓冲液 | 第47-48页 |
| ·仪器 | 第48页 |
| ·重组蛋白的Western 印迹 | 第48-49页 |
| ·蛋白质样品获得 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第48页 |
| ·半干式转移 | 第48-49页 |
| ·免疫反应 | 第49页 |
| ·木糖还原酶活性的测定 | 第49-50页 |
| ·酶液的制备 | 第49-50页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第50页 |
| ·NADH 依赖性的测定 | 第50页 |
| ·NADPH 依赖性的测定 | 第50页 |
| ·实验结果 | 第50-51页 |
| ·重组蛋白的Western Blot | 第50页 |
| ·蛋白质含量测定及辅酶依赖性测定 | 第50-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61页 |