| 提要 | 第1-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-36页 |
| 第一节、生物衰老的基因调控机制 | 第11-19页 |
| 一、 胰岛素和类胰岛素生长因子-1 信号通路 | 第11-14页 |
| 二、 热量限制途径 | 第14-16页 |
| 三、 胁迫抗性与氧化损伤 | 第16页 |
| 四、 其它基因调节途径 | 第16-19页 |
| 第二节、以秀丽线虫为模型动物进行抗衰老药物研究 | 第19-31页 |
| 一、 模型动物秀丽线虫与寿命测定 | 第19-21页 |
| 二、 利用秀丽线虫研究抗衰老药物的方法 | 第21-24页 |
| 三、 抗衰老药物研究 | 第24-31页 |
| 1. 抗自由基药物 | 第24-27页 |
| 2. 具有抗衰老作用的天然化合物 | 第27-30页 |
| 3. 其它具有抗衰老作用的药物 | 第30-31页 |
| 第三节、金属卟啉类过氧化物酶的研究进展 | 第31-36页 |
| 一、 过氧化物酶催化反应的模拟 | 第32-33页 |
| 二、 DhHP-6 的设计合成 | 第33-36页 |
| 第二章 通过RNAi 技术建立线虫衰老模型 | 第36-58页 |
| 第一节、序言 | 第36-37页 |
| 第二节、实验材料 | 第37-39页 |
| 一、 线虫、质粒与菌种 | 第37页 |
| 二、 主要试剂 | 第37页 |
| 三、 主要仪器 | 第37-38页 |
| 四、 溶液配置 | 第38-39页 |
| 第三节、实验方法 | 第39-48页 |
| 一、 目的基因的制备 | 第39-41页 |
| 1. 秀丽线虫总RNA 的提取 | 第39页 |
| 2. 引物设计 | 第39-40页 |
| 3. 目的基因的逆转录和扩增 | 第40页 |
| 4. 目的基因的酶切与纯化 | 第40-41页 |
| 二、 克隆载体的构建和鉴定 | 第41-42页 |
| 1. T载体与外源基因ctl-2 的连接. | 第41页 |
| 2. E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第41页 |
| 3. 重组质粒的转化 | 第41-42页 |
| 4. 单克隆菌种的筛选和鉴定 | 第42页 |
| 三、 表达载体的构建 | 第42-44页 |
| 1. 目的基因的制备 | 第42-43页 |
| 2. 表达载体的制备 | 第43页 |
| 3. 目的基因与载体的连接 | 第43-44页 |
| 4. E.coli HT115(DE3) 感受态细胞的制备. | 第44页 |
| 5. 亚克隆质粒的转化与筛选 | 第44页 |
| 四、 ctl-2 基因片段dsRNA 的诱导表达及RNAi | 第44页 |
| 五、 实时定量PCR. | 第44-46页 |
| 六、 秀丽线虫的培养 | 第46-48页 |
| 1. 秀丽线虫的食物 | 第46页 |
| 2. 秀丽线虫的培养及传代 | 第46-47页 |
| 3. 秀丽线虫的保存方法 | 第47-48页 |
| 4. 同期培养秀丽线虫的方法 | 第48页 |
| 5. 秀丽线虫寿命的测定方法 | 第48页 |
| 第四节、结果和讨论 | 第48-57页 |
| 一、 引物设计 | 第48-49页 |
| 二、 克隆表达载体的构建 | 第49-53页 |
| 1. 重组克隆载体构建与鉴定 | 第49-51页 |
| 2. L4440 亚克隆表达载体构建与鉴定 | 第51-53页 |
| 三、 RNA 干扰对线虫过氧化氢酶系列基因表达量的影响 | 第53-55页 |
| 四、 RNA 干扰对线虫寿命和产卵量的影响 | 第55-57页 |
| 第五节、小结 | 第57-58页 |
| 第三章 DhHP-6 抗衰老作用的实验研究 | 第58-77页 |
| 第一节、序言 | 第58页 |
| 第二节、实验材料 | 第58-60页 |
| 一、 主要试剂 | 第58-59页 |
| 二、 主要仪器 | 第59页 |
| 三、 溶液配置 | 第59-60页 |
| 第三节、实验方法 | 第60-63页 |
| 一、 秀丽线虫与寿命相关生理指标的测定 | 第60-61页 |
| 1. 产卵量的测定 | 第60页 |
| 2. 线虫运动能力的观测 | 第60页 |
| 3. 线虫吞咽频率的观测 | 第60-61页 |
| 二、 胁迫抵抗实验 | 第61页 |
| 1. 耐热实验 | 第61页 |
| 2. 百草枯诱导氧化损伤实验 | 第61页 |
| 三、 体内过氧化氢酶与超氧化物歧化酶的活力测定 | 第61-63页 |
| 1. 线虫匀浆液的制备 | 第61-62页 |
| 2. 过氧化氢酶活力测定 | 第62页 |
| 3. 超氧化物歧化酶活力测定 | 第62-63页 |
| 4. 蛋白质浓度测定 | 第63页 |
| 5. 测定匀浆液中DhHP-6 的含量 | 第63页 |
| 第四节、结果和讨论 | 第63-76页 |
| 一、 DhHP-6 对线虫寿命的影响 | 第63-70页 |
| 1. 对野生型线虫寿命的影响 | 第63-66页 |
| 2. 对野生型线虫寿命相关生理指标的影响 | 第66-67页 |
| 3. 对大肠杆菌生长的影响 | 第67-69页 |
| 4. 对过氧化氢酶表达缺失型线虫寿命的影响 | 第69-70页 |
| 二、 DhHP-6 对线虫胁迫抵抗能力的影响 | 第70-72页 |
| 三、 DhHP-6 对线虫体内抗氧化酶活力的影响 | 第72-76页 |
| 第五节、小结 | 第76-77页 |
| 第四章 DhHP-6 抗衰老作用分子机制的研究 | 第77-96页 |
| 第一节、序言 | 第77页 |
| 第二节、实验材料 | 第77-79页 |
| 一、 突变体线虫 | 第77页 |
| 二、 主要试剂 | 第77-78页 |
| 三、 主要仪器 | 第78页 |
| 四、 溶液配置 | 第78-79页 |
| 第三节、实验方法 | 第79-83页 |
| 一、 亚血红素短肽的固相合成 | 第79-80页 |
| 1. 合成试剂纯化 | 第79页 |
| 2. 亚血红素的合成及纯化 | 第79页 |
| 3. 合成前的准备 | 第79页 |
| 4. 树脂肽的合成 | 第79-80页 |
| 5. 合成后的处理 | 第80页 |
| 二、 real time RT-PCR 筛选DhHP-6 影响的衰老基因 | 第80-83页 |
| 1. 引物设计 | 第80-82页 |
| 2. real time RT-PCR | 第82-83页 |
| 第四节、结果和讨论 | 第83-95页 |
| 一、 DhHP-6 对衰老基因的影响 | 第83-88页 |
| 1. 对hsp16.1 和hsp16.49 基因表达的影响 | 第83-84页 |
| 2. 对sir-2.1 和sir-2.3 基因表达的影响 | 第84-85页 |
| 3. 对ins-17、ins-18 和Tc3 家族基因表达的影响. | 第85-87页 |
| 4. 对其它基因表达的影响 | 第87-88页 |
| 二、 DhHP-6 抗衰老作用的基因信号通路的研究 | 第88-92页 |
| 三、 DhHP-6 与DhAP-6 抗衰老效果的比较. | 第92-94页 |
| 四、 DhHP-6 参与抗衰老作用活性中间体假说 | 第94-95页 |
| 第五节、小结 | 第95-96页 |
| 第五章 结论与展望 | 第96-99页 |
| 一. 结论 | 第96-97页 |
| 二. 展望 | 第97-99页 |
| 创新点 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-115页 |
| 攻读博士期间主要研究成果 | 第115-116页 |
| 中文摘要 | 第116-121页 |
| 英文摘要 | 第121-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 作者简介 | 第127页 |
