| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 中英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 研究目的、内容和意义 | 第14-18页 |
| ·研究目的 | 第14-15页 |
| ·研究内容 | 第15-16页 |
| ·杆状病毒AcMNPV和BmNPV ubiquitin启动子的特性分析 | 第15页 |
| ·杆状病毒IE-1及hr3对晚期ubiquitin和极晚期polyhedrin启动子的作用 | 第15-16页 |
| ·病毒因子对杆状病毒泛素基因转录的调控作用 | 第16页 |
| ·耐高温β-gulosidase在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及纯化方法的建立 | 第16页 |
| ·研究意义 | 第16-18页 |
| 第一部分 杆状病毒ubiquitin、polyhedrin基因启动子分析 | 第18-68页 |
| 第二章 文献综述 | 第18-30页 |
| ·杆状病毒编码泛素的研究进展 | 第18-21页 |
| ·泛素依赖的蛋白水解系统 | 第18-19页 |
| ·病毒泛素基因的研究 | 第19-21页 |
| ·病毒基因启动子的研究 | 第21-23页 |
| ·病毒编码的启动子概况 | 第21-22页 |
| ·几种主要杆状病毒编码启动子研究进展 | 第22-23页 |
| ·泛素基因启动子研究情况 | 第23页 |
| ·杆状病毒晚期表达因子的研究 | 第23-28页 |
| ·参与病毒DNA复制的LEFs | 第25-26页 |
| ·参与病毒DNA转录的LEFs | 第26-27页 |
| ·其它转录LEFs | 第27-28页 |
| ·杆状病毒泛素启动子的研究意义 | 第28-30页 |
| 第三章 材料和方法 | 第30-40页 |
| ·细胞的冻存、复苏、传代及病毒繁殖 | 第30-31页 |
| ·冻存 | 第30页 |
| ·复苏 | 第30-31页 |
| ·PCR反应 | 第31-32页 |
| ·病毒基因组模板 | 第31页 |
| ·质粒模板 | 第31页 |
| ·普通PCR反应体系 | 第31-32页 |
| ·普通PCR反应条件 | 第32页 |
| ·定点突变PCR | 第32页 |
| ·限制性内切酶反应 | 第32页 |
| ·玻璃奶法纯化回收DNA片段 | 第32-33页 |
| ·DNA的连接 | 第33页 |
| ·荧光素酶报告质粒的构建 | 第33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒转化 | 第33-34页 |
| ·少量制备 | 第33-34页 |
| ·批量制备 | 第34页 |
| ·质粒转化 | 第34页 |
| ·质粒DNA抽提 | 第34-35页 |
| ·小量抽提 | 第34-35页 |
| ·大量抽提 | 第35页 |
| ·病毒基因组文库的构建 | 第35-36页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第35-36页 |
| ·基因组DNA的部分消化和片段的回收 | 第36页 |
| ·连接，转化及扩增 | 第36页 |
| ·质粒DNA的转染 | 第36-37页 |
| ·细胞裂解和荧光素酶活性的测定、蛋白质定量 | 第37-38页 |
| ·细胞裂解 | 第37页 |
| ·Luciferase活性测定 | 第37页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第37-38页 |
| ·细胞总RNA的抽提 | 第38页 |
| ·随机引物法标记杂交探针 | 第38-39页 |
| ·Northern blot | 第39-40页 |
| ·电泳与转膜 | 第39页 |
| ·杂交、洗膜和冲片 | 第39-40页 |
| 第四章 BmNPV、AcMNPV ubiquitin基因启动子的结构与功能分析 | 第40-51页 |
| ·材料和方法 | 第41-43页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-43页 |
| ·结果 | 第43-48页 |
| ·杆状病毒ubiquitin基因启动子的序列分析 | 第43-44页 |
| ·Northern blot分析 | 第44-45页 |
| ·ubiquitin基因启动子的功能分析 | 第45-48页 |
| ·讨论 | 第48-51页 |
| 第五章 hr3、ie-1对杆状病毒晚期、极晚期启动子的激活作用 | 第51-61页 |
| ·材料方法 | 第52-53页 |
| ·报告质粒的构建 | 第52页 |
| ·IE-1与ubiquitin基因启动子顺式元件的结合 | 第52页 |
| ·ie-1、hr3对晚期ubiquitin基因启动子的作用 | 第52页 |
| ·ie-1、hr3对极晚期基因polh启动子的作用 | 第52-53页 |
| ·家蚕饲养和转染 | 第53页 |
| ·结果 | 第53-58页 |
| ·功能质粒的构建 | 第53页 |
| ·ie-1、hr3对晚期ubiquitin基因启动子的作用 | 第53-54页 |
| ·ubiquitin启动子中对ie-1的响应区段研究 | 第54-55页 |
| ·ie-1、hr3对极晚期polh基因启动子的作用 | 第55-58页 |
| ·讨论 | 第58-61页 |
| 第六章 参与杆状病毒泛素基因转录的病毒因子的研究 | 第61-68页 |
| ·材料方法 | 第62-63页 |
| ·病毒和细胞 | 第62页 |
| ·BmNPV基因组文库构建、瞬时表达分析 | 第62页 |
| ·DNA共转染 | 第62页 |
| ·重组质粒的构建 | 第62-63页 |
| ·结果 | 第63-66页 |
| ·BmNPV文库DNA对ubiquitin启动子转录的影响 | 第63-64页 |
| ·对ubiquitin启动子具有激活作用的病毒因子 | 第64-65页 |
| ·病毒因子的突变分析 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| 第二部分 耐高温葡萄糖苷酶在家蚕杆状病毒中的表达 | 第68-90页 |
| 第七章 引言 | 第68-74页 |
| ·杆状病毒表达系统研究 | 第68-71页 |
| ·转移载体的发展 | 第68-69页 |
| ·亲本病毒及重组介质的改良 | 第69页 |
| ·外源蛋白表达的影响因素 | 第69-70页 |
| ·表达系统的应用 | 第70-71页 |
| ·高温β-葡萄糖苷酶的研究情况 | 第71-74页 |
| ·β-葡萄糖苷酶主要应用 | 第72-74页 |
| 第八章 耐高温葡萄糖苷酶在家蚕杆状病毒表达载体系统中的表达、特性分析及纯化 | 第74-87页 |
| ·材料和方法 | 第75-79页 |
| ·耐高温古细菌(Pyrococcus furiosus)基因组DNA的提取 | 第75页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第75页 |
| ·超速离心法制备病毒Bm-BacPAK6基因组DNA | 第75-76页 |
| ·Bm-BacPAK6基因组DNA的线性化 | 第76页 |
| ·共转染 | 第76页 |
| ·重组病毒的筛选、纯化和扩增 | 第76-77页 |
| ·PCR鉴定外源基因的整合 | 第77页 |
| ·家蚕接种和样品的初步纯化 | 第77页 |
| ·β-glucosidase表达时相 | 第77页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第77-78页 |
| ·celB标准曲线的制作 | 第78-79页 |
| ·耐高温β-glucosidase的活性分析 | 第79页 |
| ·结果 | 第79-84页 |
| ·celB基因序列分析及重组质粒的构建 | 第79-80页 |
| ·同源重组及重组病毒的筛选 | 第80页 |
| ·重组病毒在家蚕中的表达及初步纯化 | 第80-81页 |
| ·表达的外源蛋白的特性分析 | 第81-84页 |
| ·讨论 | 第84-87页 |
| 第九章 结论 | 第87-90页 |
| ·ubiquitin基因启动子克隆及功能分析 | 第87页 |
| ·IE-1、hr3对杆状病毒晚期ubiquitin基因启动子的调控 | 第87-88页 |
| ·IE-1、hr3对杆状病毒极晚期polh基因启动子的调控 | 第88页 |
| ·参与ubiquitin基因表达的病毒因子的鉴定 | 第88页 |
| ·耐高温β-glucosidase的表达及特性分析 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 作者简历 | 第102-103页 |
| 附录 | 第103-104页 |
