| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-16页 |
| ·热休克蛋白 | 第11-13页 |
| ·热休克蛋白的发现 | 第11页 |
| ·热休克蛋白的分子结构 | 第11-12页 |
| ·热休克蛋白的组织分布及功能 | 第12-13页 |
| ·充当分子伴侣 | 第12页 |
| ·抗氧化作用 | 第12页 |
| ·参与免疫应答 | 第12-13页 |
| ·调节细胞凋亡 | 第13页 |
| ·HSP70基因转录激活的过程 | 第13-14页 |
| ·Hsp70参与免疫反应的信号通路 | 第14-15页 |
| ·Hsp70在胞内参与免疫反应 | 第14页 |
| ·Hsp70在胞外起细胞因子作用 | 第14-15页 |
| ·本课题研究目的和内容 | 第15-16页 |
| 第二章 草鱼热休克蛋白Hsc70和Hsp70的cDNA克隆 | 第16-32页 |
| ·实验材料 | 第16-17页 |
| ·实验动物 | 第16页 |
| ·菌种和质粒 | 第16-17页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第17页 |
| ·实验试剂 | 第17页 |
| ·配制溶液 | 第17页 |
| ·实验方法与操作 | 第17-21页 |
| ·总RNA 的提取 | 第17-18页 |
| ·反转录合成cDNA 模板 | 第18页 |
| ·引物设计 | 第18-19页 |
| ·PCR扩增草鱼热休克蛋白Hsc70和Hsp70部分cDNA序列 | 第19页 |
| ·RACE 操作 | 第19-20页 |
| ·目的基因片断的克隆与测序 | 第20页 |
| ·凝胶电泳 | 第20页 |
| ·目的片段的胶回收纯化 | 第20页 |
| ·目的片段与pGM-T 载体的连接 | 第20页 |
| ·质粒DNA 的转化 | 第20页 |
| ·转化子的克隆筛选与测序 | 第20页 |
| ·生物信息学分析 | 第20-21页 |
| ·组织分布情况 | 第21页 |
| ·实验结果 | 第21-30页 |
| ·草鱼热休克蛋白Hsc70和Hsp70部分cDNA序列的获取 | 第21-22页 |
| ·用3’-RACE 方法克隆草鱼热休克蛋白Hsc70 和Hsp703’端序列 | 第22-23页 |
| ·用5’-RACE 方法克隆草鱼热休克蛋白Hsc70 和Hsp705’端序列 | 第23-24页 |
| ·核苷酸序列及推测的氨基酸序列分析 | 第24-28页 |
| ·系统进化树分析 | 第28-30页 |
| ·草鱼热休克蛋白Hsc70和Hsp70mRNA在不同组织的表达分布 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 LPS对草鱼外周血淋巴细胞HSP70表达水平的影响 | 第32-40页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·实验动物 | 第32页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第32-33页 |
| ·实验仪器 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-35页 |
| ·草鱼外周血淋巴细胞(PBL)的分离 | 第33-34页 |
| ·不同剂量LPS对草鱼PBLs中的热休克蛋白Hsc70和Hsp70mRNA表达水平的影响 | 第34页 |
| ·不同时间条件下LPS对草鱼PBLs中的热休克蛋白Hsc70和HspmRNA表达水平的影响 | 第34页 |
| ·不同时间条件下LPS对草鱼PBLs中的热休克蛋白Hsc70和Hsp70蛋白表达水平的影响 | 第34-35页 |
| ·数据统计 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-38页 |
| ·草鱼外周血淋巴细胞的分离与培养 | 第35-36页 |
| ·不同剂量LPS对草鱼PBLs中的热休克蛋白Hsc70和Hsp70mRNA表达水平的影响 | 第36页 |
| ·不同时间条件下LPS对草鱼外周血淋巴细胞中热休克蛋白Hsc70和Hsp70mRNA 表达水平的影响 | 第36-37页 |
| ·不同时间条件下LPS对草鱼外周血淋巴细胞中热休克蛋白Hsc70和Hsp70蛋白表达水平的影响 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 重组草鱼热休克蛋白Hsp70的表达和纯化 | 第40-52页 |
| ·实验材料 | 第40-42页 |
| ·菌株、载体及引物 | 第40-41页 |
| ·主要溶液配制 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·主要仪器和设备 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-46页 |
| ·聚合酶链反应(PCR)及扩增产物的胶回收纯化 | 第42页 |
| ·酶切 | 第42-43页 |
| ·回收片段连接反应 | 第43页 |
| ·E.coli感受态的制备 | 第43页 |
| ·转化和阳性克隆筛选 | 第43页 |
| ·质粒DNA 的抽提与转化 | 第43-44页 |
| ·质粒DNA 的抽提 | 第43-44页 |
| ·转化 | 第44页 |
| ·测序验证重组质粒序列 | 第44页 |
| ·菌种的保存 | 第44页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第44-46页 |
| ·优化诱导表达条件 | 第44-45页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第45页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| ·实验结果 | 第46-50页 |
| ·pET30a(+)-gcHsp70在BL21(DE3)中的表达 | 第46-49页 |
| ·pET30a(+)-gcHsp70表达质粒的构建和鉴定 | 第46-47页 |
| ·pET30a(+)-gcHsp70质粒的诱导表达 | 第47-49页 |
| ·pET30a(+)-gcHsp70在BL21(DE3)中的纯化 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 草鱼重组Hsp70（rgcHsp70）的生物学活性确定 | 第52-55页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·细胞 | 第52页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第52页 |
| ·实验仪器 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-53页 |
| ·草鱼外周血淋巴细胞(PBL)的分离 | 第52页 |
| ·不同剂量rHsp70对草鱼PBLs分泌TNF-α以及IL-1β的影响 | 第52-53页 |
| ·结果 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 攻读硕士期间取得的研究成果 | 第62-63页 |
