水稻OsICK1基因克隆及其功能初探
| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 略缩词 | 第14-15页 |
| 1 前言 | 第15-23页 |
| ·细胞周期蛋白 | 第15-16页 |
| ·细胞周期蛋白类型 | 第15页 |
| ·有丝分裂型细胞周期蛋白 | 第15页 |
| ·G1型细胞周期蛋白 | 第15页 |
| ·植物细胞周期蛋白 | 第15-16页 |
| ·CDK激酶 | 第16-18页 |
| ·CDK类型 | 第16页 |
| ·CDK结构与功能 | 第16-17页 |
| ·植物CDK | 第17-18页 |
| ·ICK | 第18-19页 |
| ·ICK类型 | 第18-19页 |
| ·植物ICK及研究进展 | 第19页 |
| ·细胞周期及其调控 | 第19-22页 |
| ·细胞周期 | 第19-20页 |
| ·细胞周期调控机制 | 第20-22页 |
| ·本文研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-40页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·主要化学试剂及仪器 | 第23-24页 |
| ·主要化学试剂 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-40页 |
| ·基因克隆 | 第24-27页 |
| ·水稻总RNA的提取 | 第24页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第25页 |
| ·DNA连接反应 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第26页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第26-27页 |
| ·PCR产物测序 | 第27页 |
| ·基因序列分析 | 第27页 |
| ·植物过量表达载体构建 | 第27-30页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·OsICK1 cDNA的获得 | 第27页 |
| ·载体构建 | 第27-30页 |
| ·水稻遗传转化 | 第30-31页 |
| ·水稻幼胚愈伤组织的诱导培养 | 第30-31页 |
| ·农杆菌侵染液的制备 | 第31页 |
| ·转化感染 | 第31页 |
| ·预分化 | 第31页 |
| ·分化及再生培养 | 第31页 |
| ·OsICK1基因的原核表达及其抗体制备 | 第31-34页 |
| ·原核表达载体构建 | 第31页 |
| ·诱导表达及蛋白的存在形式 | 第31-32页 |
| ·目的表达蛋白的MALDI-TOF-MS分析 | 第32页 |
| ·电洗脱回收目的蛋白 | 第32页 |
| ·免疫小鼠 | 第32页 |
| ·间接ELISA法检测抗血清效价 | 第32-33页 |
| ·Western blotting蛋白特异性分析 | 第33-34页 |
| ·转基因水稻检测 | 第34-40页 |
| ·酶组织化学法检测GUS基因的表达 | 第34页 |
| ·转基因植株总DNA的提取与纯化 | 第34页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第34-35页 |
| ·斑点杂交 | 第35-36页 |
| ·Southern杂交检测 | 第36-37页 |
| ·实时荧光PCR检测OsICK1基因的转录水平 | 第37-40页 |
| ·转基因水稻性状观察与分析 | 第40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-53页 |
| ·水稻OsICK1基因克隆和序列比对 | 第40-43页 |
| ·植物过量表达载体构建 | 第43-46页 |
| ·愈伤组织GUS基因表达检测和转基因再生小苗 | 第46-47页 |
| ·OsICK1基因的原核表达及其抗体制备 | 第47-49页 |
| ·再生植株叶片和根的GUS基因表达检测 | 第49页 |
| ·PCR检测 | 第49-50页 |
| ·Soutern斑点杂交检测 | 第50页 |
| ·Southern检测 | 第50-51页 |
| ·转基因水稻性状观察 | 第51-52页 |
| ·转基因水稻中OsICK1基因的转录水平 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| ·水稻OsICK1基因克隆 | 第53-54页 |
| ·水稻愈伤组织诱导及转化 | 第54页 |
| ·实时荧光PCR检测 | 第54-55页 |
| ·OsICK1基因对水稻植株生长和发育的影响 | 第55页 |
| ·OsICK1基因的原核表达及抗体制备 | 第55-56页 |
| ·工作展望 | 第56-57页 |
| 5 小结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附录一:培养基及试剂的配制 | 第63-65页 |
| 附录二:测序报告 | 第65-66页 |
