| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一部分 前言 | 第13-36页 |
| 1 研究背景 | 第13-36页 |
| ·大肠癌(colorectal cancer,CRC) | 第13-18页 |
| ·大肠癌的简介 | 第13-14页 |
| ·大肠癌的发生 | 第14-15页 |
| ·大肠癌的TNM分期 | 第15-16页 |
| ·大肠癌的临床症状及诊断 | 第16-18页 |
| ·微转移的概念 | 第18-19页 |
| ·血管生成和微转移的生物学行为 | 第19页 |
| ·微转移和临床转移 | 第19-20页 |
| ·大肠癌微转移的检测方法 | 第20-25页 |
| ·连续切片法 | 第20-21页 |
| ·免疫组织化学技术 | 第21页 |
| ·放射免疫导向手术 | 第21-22页 |
| ·流式细胞分析技术 | 第22-23页 |
| ·逆转录聚合酶链反应 | 第23-25页 |
| ·生物芯片 | 第25页 |
| ·大肠癌微转移检测的分子标记物 | 第25-30页 |
| ·癌胚抗原CEA | 第26-27页 |
| ·CK细胞角蛋白 | 第27页 |
| ·CD44粘附分子蛋白 | 第27-28页 |
| ·VEGF血管内皮细胞生长因子 | 第28-29页 |
| ·GC-C鸟苷酰环化酶C | 第29页 |
| ·MMP-7 | 第29-30页 |
| ·突变基因 | 第30页 |
| ·大肠癌微转移检测的途径 | 第30-34页 |
| ·周围静脉血 | 第30-31页 |
| ·淋巴结 | 第31-32页 |
| ·骨髓 | 第32-33页 |
| ·腹腔 | 第33-34页 |
| ·研究意义及研究思路 | 第34-36页 |
| 第二部分 利用CK-19、CK-20和CEA分子标记侦测大肠癌患者血液中循环性癌细胞 | 第36-74页 |
| 1 前言 | 第36页 |
| 2 材料与方法 | 第36-49页 |
| ·临床资料 | 第37-38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·主要试剂配方 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-46页 |
| ·外周血标本的采集与处理 | 第41页 |
| ·RNA抽提 | 第41-42页 |
| ·1%甲醛变性琼脂糖凝胶(1.8%甲醛)电泳 | 第42页 |
| ·逆转录(RT)合成cDNA第一链 | 第42-43页 |
| ·聚合酶链反应引物序列 | 第43-44页 |
| ·聚合酶链反应 | 第44-46页 |
| ·RT-PCR扩增产物分析 | 第46-47页 |
| ·PCR产物纯化及DNA测序 | 第47-48页 |
| ·PCR产物纯化 | 第47页 |
| ·测序反应PCR | 第47页 |
| ·测序反应产物纯化 | 第47-48页 |
| ·RT-PCR灵敏度测定 | 第48页 |
| ·SW-480大肠癌细胞的培养 | 第48页 |
| ·SW-480大肠癌细胞的稀释策略 | 第48页 |
| ·病例回访 | 第48-49页 |
| ·统计分析 | 第49页 |
| 3 实验结果 | 第49-67页 |
| ·本组资料的病例学特点 | 第49-50页 |
| ·年龄、性别、肿瘤大小及部位 | 第49页 |
| ·组织病理类型 | 第49页 |
| ·临床特征 | 第49-50页 |
| ·总RNA鉴定 | 第50-51页 |
| ·RT-PCR方法检测外周血中CK-19、CK-20、CEA mRNA的表达 | 第51-53页 |
| ·RT-PCR方法检测外周血中分子标志的灵敏度 | 第53-54页 |
| ·靶基因检出率与临床病理之间的关系 | 第54-66页 |
| ·CK-19、CK-20、CEA mRNA的表达与性别的关系 | 第54-55页 |
| ·CK-19、CK-20、CEA mRNA的表达与年龄的关系 | 第55-56页 |
| ·CK-19、CK-20、CEA mRNA的表达与肿瘤发生部位的关系 | 第56-57页 |
| ·CK-19、CK-20、CEA mRNA的表达与肿瘤长度的关系 | 第57-58页 |
| ·CK-19、CK-20、CEA mRNA的表达与肿瘤分化程度的关系 | 第58-59页 |
| ·CK-19、CK-20、CEA mRNA的表达与肿瘤浸润程度的关系 | 第59-61页 |
| ·CK-19、CK-20、CEA mRNA的表达与淋巴转移的关系 | 第61-62页 |
| ·CK-19、CK-20、CEA mRNA的表达与TNM分期的关系 | 第62-63页 |
| ·CK-19、CK-20、CEA mRNA的表达与血管浸润的关系 | 第63-64页 |
| ·CK-19、CK-20、CEA mRNA的表达与神经束膜浸润的关系 | 第64-65页 |
| ·CK-19、CK-20、CEA mRNA的表达与远处转移的关系 | 第65-66页 |
| ·靶基因表达、临床病理特征与术后微转移的关系 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-73页 |
| ·关于RT-PCR检测方法 | 第67-68页 |
| ·分子靶标的选择 | 第68-69页 |
| ·外周血中靶基因的表达、临床病理学特征及其术后微转移 | 第69-71页 |
| ·外周血中靶基因表达检测的意义 | 第71-73页 |
| 5 小结 | 第73-74页 |
| 第三部分 实时荧光定量PCR方法侦测大肠癌患者血液中循环性癌细胞 | 第74-107页 |
| 1 前言 | 第74页 |
| 2 材料与方法 | 第74-87页 |
| ·临床资料 | 第74-76页 |
| ·主要仪器 | 第76-77页 |
| ·主要试剂 | 第77-78页 |
| ·实验方法 | 第78-87页 |
| ·外周血标本的采集与处理 | 第78页 |
| ·外周血总RNA的抽提 | 第78页 |
| ·大肠息肉组织总RNA的抽提 | 第78-79页 |
| ·mRNA的分离 | 第79-80页 |
| ·ds cDNA的合成 | 第80-82页 |
| ·聚合酶链反应引物序列 | 第82页 |
| ·荧光定量PCR的实验设计 | 第82-83页 |
| ·荧光定量PCR的加样体系和反应条件 | 第83-85页 |
| ·荧光定量PCR结果的处理 | 第85-86页 |
| ·统计学分析 | 第86-87页 |
| 3 实验技术路线 | 第87-88页 |
| 4 实验结果 | 第88-98页 |
| ·熔解曲线的获得 | 第88-89页 |
| ·扩增效率的确定 | 第89页 |
| ·荧光定量PCR扩增靶基因 | 第89-91页 |
| ·CK-19分子标记(mRNA)荧光定量PCR结果分析 | 第91-92页 |
| ·CK-20分子标记(mRNA)荧光定量PCR结果分析 | 第92-94页 |
| ·CEA分子标记(mRNA)荧光定量PCR结果分析 | 第94-96页 |
| ·组织和外周血中CK-19、CK-20、CEA分子标记的检测比对 | 第96-98页 |
| 5 讨论 | 第98-106页 |
| ·关于荧光定量PCR技术 | 第98-99页 |
| ·荧光定量PCR技术的原理 | 第99-101页 |
| ·荧光探针技术 | 第99-101页 |
| ·SYBR GreenⅠ荧光染料法 | 第101页 |
| ·荧光定量PCR的定量方法 | 第101-103页 |
| ·标准曲线法的绝对定量 | 第102页 |
| ·标准曲线法的相对定量 | 第102-103页 |
| ·比较CT法的相对定量 | 第103页 |
| ·临床诊断标准的评价 | 第103-106页 |
| 6 小结 | 第106-107页 |
| 第四部分 前景与展望 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
