| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1. 前言 | 第9-19页 |
| ·卵透明带简述 | 第10-15页 |
| ·卵透明带蛋白 | 第10-11页 |
| ·卵透明带在精卵结合中的作用 | 第11-12页 |
| ·透明带蛋白的基因及其在体内的表达 | 第12-13页 |
| ·ZP蛋白作为抗生育疫苗的潜力 | 第13-15页 |
| ·重组ZP蛋白的研究 | 第15-16页 |
| ·本研究课题的立论依据、目的及意义 | 第16-17页 |
| ·本研究的技术路线 | 第17-19页 |
| 2. 仪器、材料与试剂 | 第19-22页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·材料 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-22页 |
| 3. 实验方法 | 第22-36页 |
| ·构建重组基因表达质粒 | 第22-27页 |
| ·PCR扩增目的基因片段——人卵透明带ZP3蛋白基因片段 | 第22页 |
| ·载体pPICZαA的制备 | 第22-23页 |
| ·扩增片段和载体的双酶切 | 第23-24页 |
| ·外源基因与载体的连接 | 第24页 |
| ·氯化钙法制备大肠杆菌Top10感受态细胞 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌Top10的转化 | 第25页 |
| ·转化子的检测和鉴定 | 第25-27页 |
| ·重组外源基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达 | 第27-30页 |
| ·酵母细胞的转化 | 第27-28页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第28-29页 |
| ·表达蛋白的鉴定 | 第29-30页 |
| ·工程菌发酵罐高密度培养 | 第30-32页 |
| ·猴抗重组人卵透明带蛋白(rhZP3)抗血清的制备和鉴定 | 第32-36页 |
| ·抗原乳剂的制备 | 第32页 |
| ·实验动物准备 | 第32页 |
| ·免疫途径和方法 | 第32-33页 |
| ·ELISA检测抗血清效价 | 第33页 |
| ·抗rhZP3抗血清的免疫组化鉴定 | 第33-34页 |
| ·猴抗rhZP3抗血清对小鼠精卵结合的影响 | 第34-36页 |
| 4. 实验结果 | 第36-48页 |
| ·重组质粒的构建 | 第36-38页 |
| ·目的基因片段的PCR扩增结果 | 第36页 |
| ·重组质粒的构建及鉴定结果 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的酶切结果 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的测序 | 第38页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第38-41页 |
| ·PCR鉴定重组酵母 | 第38-39页 |
| ·多拷贝转化子的筛选 | 第39页 |
| ·hZP3基因在酵母中的表达 | 第39-41页 |
| ·重组酵母高密度发酵条件的优化及重组蛋白的表达 | 第41-43页 |
| ·接种初始pH对进入对数增长期时间的影响 | 第41-42页 |
| ·诱导启动时间对表达量的影响 | 第42页 |
| ·甲醇诱导时间 | 第42-43页 |
| ·rhZP3免疫食蟹猴的研究 | 第43-48页 |
| ·动物的免疫 | 第43页 |
| ·抗体滴度的检测 | 第43-44页 |
| ·抗体的免疫组化检测 | 第44-45页 |
| ·猴抗rhZP3抗血清对小鼠精卵结合的影响 | 第45-48页 |
| 5. 讨论 | 第48-55页 |
| ·毕赤酵母工程菌的构建 | 第48-49页 |
| ·高密度发酵表达与纯化 | 第49-51页 |
| ·免疫食蟹猴 | 第51-52页 |
| ·抗rhZP3抗血清的生物学活性 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 6. 参考文献 | 第55-59页 |
| 附录一 常用试剂的配制方法 | 第59-66页 |
| 附录二 重组质粒测序结果及氨基酸序列 | 第66-69页 |
| 附录三 缩略词表 | 第69-70页 |
| 附录四 在校期间发表研究论文情况 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
