| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 1. 课题的提出 | 第10-20页 |
| ·课题的背景 | 第10-11页 |
| ·课题的目标 | 第11页 |
| ·前人研究进展 | 第11-20页 |
| ·柑橘转基因研究 | 第11-15页 |
| ·概况 | 第11-12页 |
| ·柑橘农杆菌转化研究的几个方面 | 第12-15页 |
| ·GFP研究 | 第15-20页 |
| ·概况 | 第15-19页 |
| ·GFP在柑橘研究上的应用 | 第19-20页 |
| 2. 材料与方法 | 第20-27页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·外植体材料 | 第20-21页 |
| ·农杆菌 | 第21页 |
| ·所用主要培养基配方 | 第21页 |
| ·主要生化试剂 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-27页 |
| ·将质粒转入农杆菌 | 第21-23页 |
| ·提取质粒DNA(碱裂解法) | 第21-22页 |
| ·制备感受态农杆菌细胞 | 第22页 |
| ·质粒转化(热激法) | 第22-23页 |
| ·农杆菌转化柑橘愈伤组织和上胚轴 | 第23-27页 |
| ·柑橘外植体材料的准备 | 第23-24页 |
| ·农杆菌侵染液的制备 | 第24页 |
| ·侵染与共培养 | 第24页 |
| ·GFP荧光检测 | 第24页 |
| ·筛选培养、再生与移栽 | 第24页 |
| ·分子检测: PCR,Southern Blot | 第24-27页 |
| ·柑橘基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·转化柑橘材料的PCR鉴定 | 第25页 |
| ·部分转化材料的Southern杂交分析: | 第25-27页 |
| 3. 结果与分析 | 第27-37页 |
| ·已得到的转化材料及其再生状况 | 第27页 |
| ·愈伤组织转化 | 第27-33页 |
| ·转化率 | 第27-31页 |
| ·转化率统计 | 第27-29页 |
| ·影响转化率的内因——受体材料与农杆菌的互作 | 第29页 |
| ·影响转化率的外因——实验操作 | 第29-31页 |
| ·各转化材料再生 | 第31页 |
| ·转化材料中的GFP表达 | 第31-33页 |
| ·试管实生苗上胚轴和子叶的转化 | 第33-36页 |
| ·再生体系 | 第33-34页 |
| ·转化效率 | 第34-35页 |
| ·转化率统计 | 第34页 |
| ·转化率分析 | 第34-35页 |
| ·嵌合体 | 第35-36页 |
| ·表达量变化 | 第36页 |
| ·PCR鉴定和Southern杂交分析 | 第36-37页 |
| 4. 讨论 | 第37-44页 |
| ·农杆菌介导的柑橘遗传转化中外植体及其再生途径的选择 | 第37-39页 |
| ·愈伤组织 | 第37页 |
| ·上胚轴 | 第37-39页 |
| ·转化试验体系的优化 | 第39-41页 |
| ·外植体 | 第39页 |
| ·农杆菌 | 第39-40页 |
| ·试验操作 | 第40-41页 |
| ·GFP在遗传转化中的应用及注意事项 | 第41-42页 |
| ·优越性 | 第41页 |
| ·注意事项 | 第41-42页 |
| ·存在的问题 | 第42页 |
| ·GFP作为细胞系标记在柑橘研究中的应用 | 第42-44页 |
| 5. 总结与展望 | 第44-47页 |
| ·本研究成果以及有待改进之处 | 第44-46页 |
| ·基于本实验可以开展的下一步工作 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 图版说明 | 第51-53页 |
| 图版1 GWZ再生过程中的GFP表达 | 第53-54页 |
| 图版2 GWZ嵌合体 | 第54-55页 |
| 图版3 BTC再生过程中的GFP表达 | 第55-56页 |
| 图版4 BTC转化再生过程 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |