| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-23页 |
| ·γ-干扰素研究进展 | 第15-18页 |
| ·γ-干扰素的产生和分类 | 第15-16页 |
| ·γ-干扰素的理化性质 | 第16-17页 |
| ·γ-干扰素生物学活性与免疫学活性 | 第17-18页 |
| ·γ-干扰素在临床兽医上的应用 | 第18页 |
| ·γ-干扰素释放试验在结核病诊断中的应用 | 第18-20页 |
| ·γ-干扰素释放试验的建立与发展 | 第18-19页 |
| ·γ-干扰素释放试验在结核病诊断中的应用 | 第19-20页 |
| ·牛γ-干扰素释放试验在兽医临床中的应用 | 第20页 |
| ·γ-干扰素单克隆抗体的应用及发展前景 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 重组牛γ-干扰素的原核表达及鉴定 | 第23-40页 |
| 摘要 | 第23页 |
| ·实验材料 | 第23-26页 |
| ·菌体、细胞和病毒 | 第23页 |
| ·试剂及耗材 | 第23页 |
| ·实验试剂及配制方法 | 第23-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-32页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·奶牛外周血淋巴细胞的分离 | 第26页 |
| ·Trizol 法提取细胞总 RNA | 第26页 |
| ·RT-PCR 扩增牛 IFN-γ基因片段 | 第26-27页 |
| ·PCR 产物及载体的双酶切 | 第27-28页 |
| ·连接 | 第28-29页 |
| ·转化 | 第29页 |
| ·阳性克隆的 PCR 鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及可溶性分析 | 第30页 |
| ·Western blotting 鉴定重组蛋白 | 第30-31页 |
| ·BOVIGAM 牛 IFN-γ ELISA 检测试剂盒检测重组蛋白 | 第31页 |
| ·重组牛 IFN-γ的纯化及定量 | 第31页 |
| ·MDBK/VSV 系统鉴定重组牛 IFN-γ的抗病毒活性 | 第31-32页 |
| ·实验结果与分析 | 第32-38页 |
| ·RT-PCR 扩增牛 IFN-γ基因片段 | 第32-33页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定结果 | 第33页 |
| ·重组阳性质粒的测序鉴定 | 第33-35页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第35页 |
| ·重组蛋白的可溶性分析 | 第35-36页 |
| ·Western blotting 鉴定结果 | 第36页 |
| ·BOVIGAM 牛 IFN-γ ELISA 检测试剂盒检测结果 | 第36页 |
| ·重组蛋白 rIFN-γ-His 和 rIFN-γ-GST 的纯化 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白浓度的定量结果 | 第37页 |
| ·重组牛 IFN-γ抗病毒活性鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 重组牛γ-干扰素的杆状病毒表达及鉴定 | 第40-55页 |
| 摘要 | 第40页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·菌体、细胞和病毒 | 第40页 |
| ·试剂及耗材 | 第40页 |
| ·实验试剂及配制方法 | 第40-41页 |
| ·主要仪器设备 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-47页 |
| ·引物设计及目的基因 PCR 扩增 | 第41-42页 |
| ·PCR 产物及转移载体的酶切与回收 | 第42页 |
| ·目的基因与转移载体的连接 | 第42页 |
| ·重组转移载体的转化 | 第42页 |
| ·重组转移载体的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组转移载体的转座及重组转座子的提取与鉴定 | 第43-45页 |
| ·转染 | 第45-46页 |
| ·sf21 昆虫细胞悬浮培养 | 第46页 |
| ·重组杆状病毒的表达 | 第46页 |
| ·杆状病毒表达重组蛋白的鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白的纯化及定量 | 第47页 |
| ·rIFN-γ-Bac 抗病毒活性鉴定结果 | 第47页 |
| ·rIFN-γ-Bac 的质谱鉴定 | 第47页 |
| ·实验结果与分析 | 第47-53页 |
| ·重组转移载体的双酶切鉴定 | 第47页 |
| ·重组转移载体的测序鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组转座子 Bacmid- IFN-γ的 PCR 鉴定 | 第48-49页 |
| ·转染后 sf21 昆虫细胞形态观察 | 第49页 |
| ·重组杆状病毒的表达鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组杆状病毒表达蛋白的可溶性分析 | 第50页 |
| ·重组杆状病毒表达蛋白的 Western blotting 分析 | 第50-51页 |
| ·BOVIGAM 牛 IFN-γ ELISA 检测试剂盒检测结果 | 第51页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第51页 |
| ·重组蛋白浓度的定量结果 | 第51页 |
| ·rIFN-γ-Bac 抗病毒活性鉴定结果 | 第51-52页 |
| ·rIFN-γ-Bac 的质谱鉴定结果 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 牛γ-干扰素单克隆抗体的制备及鉴定 | 第55-65页 |
| 摘要 | 第55页 |
| ·实验材料 | 第55-56页 |
| ·菌株、细胞及实验动物 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第55-56页 |
| ·主要仪器设备 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-61页 |
| ·BALB/c 小鼠的免疫 | 第56-57页 |
| ·免疫小鼠血清中抗体效价检测 | 第57页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第57-59页 |
| ·细胞的冻存与复苏 | 第59页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第59-60页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第60-61页 |
| ·实验结果 | 第61-64页 |
| ·小鼠血清及腹水中抗体效价测定 | 第61页 |
| ·单克隆抗体的亚类鉴定结果 | 第61-62页 |
| ·间接 ELISA 检测结果 | 第62页 |
| ·单克隆抗体的免疫荧光检测结果 | 第62-63页 |
| ·单克隆抗体的抗原表位分析 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| ·免疫原的制备及动物免疫 | 第64页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第64-65页 |
| 第五章 牛γ-干扰素多克隆抗体的制备及鉴定 | 第65-71页 |
| 摘要 | 第65页 |
| ·实验材料 | 第65页 |
| ·菌株和实验动物 | 第65页 |
| ·主要试剂 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-66页 |
| ·重组抗原免疫新西兰白兔 | 第65页 |
| ·兔血清中多抗效价的测定 | 第65-66页 |
| ·多抗的间接免疫荧光试验 | 第66页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第66页 |
| ·BAB-ELISA 夹心法验证多抗的特异性和亲和力 | 第66-67页 |
| ·ELISA 反应程序 | 第66-67页 |
| ·ELISA 最佳反应条件的优化 | 第67页 |
| ·实验结果 | 第67-70页 |
| ·兔血清中多抗效价的测定 | 第67页 |
| ·多抗的纯化 | 第67-68页 |
| ·多抗包被量的确定 | 第68页 |
| ·多抗的间接免疫荧光试验 | 第68-69页 |
| ·封闭液的选择 | 第69页 |
| ·底物最佳作用时间优化结果 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| 第六章 全文总结 | 第71-72页 |
| ·牛IFN-γ的原核表达 | 第71页 |
| ·牛IFN-γ的杆状病毒表达 | 第71页 |
| ·牛IFN-γ单克隆抗体的制备 | 第71页 |
| ·牛IFN-γ多克隆抗体的制备 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简历 | 第77页 |
