| 第一章 转基因动物乳腺生物反应器的研究进展 | 第1-23页 |
| ·乳腺特异性表达载体的构建 | 第11-18页 |
| ·调控序列 | 第11-14页 |
| ·提高外源基因表达效率的策略 | 第14-16页 |
| ·基质结合区 | 第14-15页 |
| ·改良基因结构以减弱“位置效应” | 第15-16页 |
| ·人工染色体于乳腺生物反应器的运用 | 第16-17页 |
| ·基因打靶 | 第17-18页 |
| ·乳腺表达载体的检验方法 | 第18-21页 |
| ·乳腺细胞表达分析法 | 第18-20页 |
| ·动物乳腺暂态表达法 | 第20-21页 |
| ·转基因小鼠表达法 | 第21页 |
| ·小结与展望 | 第21-23页 |
| 第二章 山羊BLG基因5′调控序列克隆及其调控GFP基因细胞表达 | 第23-39页 |
| ·材料与方法 | 第23-32页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·实验材料 | 第23页 |
| ·质粒和菌种 | 第23-24页 |
| ·试剂和仪器 | 第24-26页 |
| ·方法 | 第26-32页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·山羊基因组DNA的提取 | 第26页 |
| ·山羊BLG基因5′调控成分PCR扩增 | 第26页 |
| ·琼脂糖电泳 | 第26页 |
| ·目的片段的克隆、鉴定和序列测定 | 第26-29页 |
| ·pBLG-GFP乳腺表达载体构建 | 第29-30页 |
| ·pBLG和pEGFP-C1的AseI和NheI的双酶切 | 第29-30页 |
| ·片段blg和egfp的定向连接 | 第30页 |
| ·转化 | 第30页 |
| ·载体构建过程见图2-4 | 第30页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞的体外培养 | 第30-31页 |
| ·乳腺组织的取材 | 第30页 |
| ·乳腺细胞的培养 | 第30-31页 |
| ·培养液的准备 | 第30页 |
| ·组织块培养法 | 第30-31页 |
| ·细胞活力的评定 | 第31页 |
| ·细胞传代及上皮细胞的纯化 | 第31页 |
| ·细胞计数 | 第31页 |
| ·细胞冻存 | 第31页 |
| ·载体pBLG-GFP脂质体转染山羊乳腺细胞 | 第31-32页 |
| ·GFP报告基因的细胞表达 | 第32页 |
| ·结果 | 第32-35页 |
| ·山羊基因组DNA的完整性 | 第32页 |
| ·山羊BLG基因5′调控成分的PCR扩增结果 | 第32-33页 |
| ·重组质粒酶切鉴定结果 | 第33页 |
| ·序列分析结果 | 第33页 |
| ·pBLG-GFP乳腺表达载体的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·原代培养细胞 | 第34页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞与成纤维细胞的分离纯化 | 第34-35页 |
| ·载体pBLG-GFP转化乳腺细胞后荧光显微镜观察结果 | 第35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| ·小结 | 第37-39页 |
| 第三章 人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建 | 第39-49页 |
| ·材料和方法 | 第40-43页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·质粒和菌种 | 第40页 |
| · 主要试剂和仪器 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-43页 |
| ·人的基质结合区(MAR)的克隆 | 第40-41页 |
| ·引物设计 | 第40-41页 |
| ·山羊基因组DNA的提取 | 第41页 |
| ·人基质结合区序列的PCR扩增 | 第41页 |
| ·琼脂糖电泳 | 第41页 |
| ·目的片段的克隆、鉴定和序列测定 | 第41页 |
| ·质粒载体pLF的酶切鉴定 | 第41页 |
| ·人乳铁蛋白特异性表达载体构建 | 第41-43页 |
| ·pBlG、pEGFP-C1的AseI和HindIII双酶切 | 第41-42页 |
| ·pLF、pEB的HindⅢ和SalⅠ双酶切 | 第42页 |
| ·pBL、pMR的SalⅠ和BamHI双酶切 | 第42-43页 |
| ·结果 | 第43-45页 |
| ·人基质结合区的PCR扩增结果 | 第43页 |
| ·重组质粒酶切鉴定结果 | 第43页 |
| ·pLF重组质粒酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·人乳铁蛋白乳腺表达载体的构建第一步结果 | 第44页 |
| ·人乳铁蛋白乳腺表达载体构建第二步结果 | 第44页 |
| ·人乳铁蛋白乳腺表达载体构建第三步结果 | 第44-45页 |
| ·人乳铁蛋白特异性表达载体pBLM双酶切结果 | 第44页 |
| ·人乳铁蛋白特异性表达载体构建见流程图3-7 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-49页 |
| 第四章 人乳铁蛋白基因在体外培养山羊乳腺上皮细胞中的表达研究 | 第49-54页 |
| ·材料和方法 | 第49-50页 |
| ·细胞和质粒 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-51页 |
| ·pBL质粒DNA的纯化 | 第50页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞的培养 | 第50页 |
| ·转染细胞的准备 | 第50页 |
| ·G418对山羊乳腺上皮细胞的最小致死量测定 | 第50页 |
| ·脂质体/DNA的准备 | 第50页 |
| ·培养的乳腺上皮细胞的转染 | 第50页 |
| ·G418筛选转染细胞 | 第50-51页 |
| ·筛选细胞PCR检测 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-52页 |
| ·利用G418筛选转然的乳腺细胞的结果 | 第51页 |
| ·质脂体和DNA复合物的制备 | 第51页 |
| ·G418对山羊乳腺上皮细胞最小致死量的测定结果 | 第51页 |
| ·筛选后细胞的PCR检测结果 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53页 |
| ·下一步研究计划 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62-65页 |
