| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 芜菁花叶病毒研究进展 | 第13-34页 |
| 1.芜菁花叶病毒普通生物学研究 | 第13-20页 |
| ·分布 | 第13-14页 |
| ·寄主与病症 | 第14页 |
| ·传播 | 第14-15页 |
| ·病毒亚结构 | 第15页 |
| ·株系(或致病型) | 第15-17页 |
| ·寄主植物的抗性 | 第17-18页 |
| ·TuMV侵染对寄主生理生化特性的影响 | 第18页 |
| ·病害流行和防治 | 第18-20页 |
| 2.芜菁花叶病毒分子生物学研究 | 第20-30页 |
| ·TuMV基因组的结构 | 第20-21页 |
| ·TuMV基因组的功能 | 第21-26页 |
| ·P1蛋白 | 第21页 |
| ·HC-Pro蛋白 | 第21-22页 |
| ·P3蛋白 | 第22页 |
| ·6K1蛋白 | 第22页 |
| ·CI蛋白 | 第22-23页 |
| ·6K2蛋白 | 第23页 |
| ·VPg蛋白 | 第23-24页 |
| ·NIa蛋白 | 第24-25页 |
| ·NIb蛋白 | 第25页 |
| ·CP蛋白 | 第25-26页 |
| ·TuMV基因组的变异 | 第26-27页 |
| ·寄主的抗性基因 | 第27-29页 |
| ·转基因研究 | 第29-30页 |
| 3.芜菁花叶病毒病原的检测与鉴定 | 第30-34页 |
| ·利用寄主病症和寄主范围 | 第30页 |
| ·利用病毒传播方式、病毒包含体和电镜 | 第30-31页 |
| ·利用ELISA | 第31页 |
| ·利用单克隆抗体 | 第31-33页 |
| ·利用分子生物学技术 | 第33-34页 |
| 第二章 芜菁花叶病毒单克隆抗体制备及检测研究 | 第34-69页 |
| 第一节 浙江雪菜花叶病病原鉴定 | 第34-46页 |
| 1.材料与方法 | 第34-39页 |
| ·常用生化试剂 | 第34页 |
| ·常用缓冲液的配制 | 第34页 |
| ·毒源与抗血清 | 第34页 |
| ·病毒提纯 | 第34-35页 |
| ·病毒粒子的电镜观察 | 第35页 |
| ·提纯病毒紫外检测 | 第35页 |
| ·鉴别寄主反应 | 第35页 |
| ·IC-RT-PCR(Immunocapture RT-PCR) | 第35-37页 |
| ·cDNA合成 | 第35-36页 |
| ·PCR扩增 | 第36页 |
| ·PCR产物纯化 | 第36-37页 |
| ·目的片段连接 | 第37页 |
| ·感受态细胞制备方法(TB法)转化 | 第37页 |
| ·转化 | 第37-38页 |
| ·菌落PCR | 第38页 |
| ·重组质粒的提取纯化 | 第38页 |
| ·酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·TuMV CP和HC-Pro基因的序列测定与分析 | 第39页 |
| ·间接酶联免疫吸附法(Indirect ELISA)检测 | 第39页 |
| 2.结果与分析 | 第39-44页 |
| ·提纯病毒的电镜观察 | 第39-40页 |
| ·鉴别寄主的反应 | 第40-41页 |
| ·IC-RT-PCR扩增及扩增产物的克隆和序列测定 | 第41-42页 |
| ·间接酶联免疫吸附测定结果 | 第42-44页 |
| 3.讨论 | 第44-46页 |
| 第二节 芜菁花叶病毒单克隆抗体制备及检测应用 | 第46-57页 |
| 1.材料与方法 | 第46-51页 |
| ·毒源及抗血清 | 第46页 |
| ·常用生化试剂 | 第46页 |
| ·常用缓冲液的配制 | 第46页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第46-48页 |
| ·免疫小鼠 | 第46页 |
| ·细胞融合 | 第46-47页 |
| ·杂交瘤细胞筛选与克隆 | 第47页 |
| ·腹水单抗的制备 | 第47页 |
| ·腹水单抗的效价测定 | 第47页 |
| ·腹水单抗的纯化 | 第47-48页 |
| ·单抗亚类鉴定 | 第48页 |
| ·Western印迹分析 | 第48-49页 |
| ·植物可溶性蛋白样品的制备 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE | 第48-49页 |
| ·电转移 | 第49页 |
| ·Western印迹分析 | 第49页 |
| ·TAS-ELISA方法的建立 | 第49-50页 |
| ·TAS-ELISA操作步骤 | 第49-50页 |
| ·TAS-ELISA最适条件测定 | 第50页 |
| ·TAS-ELISA灵敏度测定 | 第50页 |
| ·TAS-ELISA的特异性检测 | 第50页 |
| ·TAS-ELISA检测田间病样 | 第50-51页 |
| 2.结果与分析 | 第51-56页 |
| ·杂交瘤细胞的融合、筛选与克隆 | 第51页 |
| ·腹水抗体纯化、效价测定及抗体类型 | 第51-52页 |
| ·Western blot分析 | 第52页 |
| ·TAS-ELISA最适条件确定 | 第52-53页 |
| ·多抗血清最适工作浓度 | 第52页 |
| ·单抗腹水最适工作浓度 | 第52-53页 |
| ·TAS-ELISA灵敏度测定 | 第53-55页 |
| ·病叶粗汁液 | 第53-54页 |
| ·提纯病毒 | 第54-55页 |
| ·TAS-ELISA的特异性检测 | 第55-56页 |
| 3.讨论 | 第56-57页 |
| 第三节 利用芜菁花叶病毒单克隆抗体测定雪菜品种对TuMV的抗病性 | 第57-69页 |
| 1.材料与方法 | 第57-59页 |
| ·毒源与抗血清 | 第57-58页 |
| ·供试品种 | 第58页 |
| ·温室接种实验 | 第58页 |
| ·大田接种实验 | 第58页 |
| ·病情调查 | 第58-59页 |
| ·TAS-ELISA检测 | 第59页 |
| 2.结果及分析 | 第59-67页 |
| ·病情调查 | 第59-60页 |
| ·TAS-ELISA检测 | 第60-67页 |
| 3.讨论 | 第67-69页 |
| 第三章 TuMV分离物的CP和HC-Pro基因变异及进化 | 第69-89页 |
| 1.材料与方法 | 第70-72页 |
| ·病毒分离物 | 第70页 |
| ·RT-PCR扩增CP和HC-Pro基因 | 第70-71页 |
| ·RNA抽提 | 第70页 |
| ·cDNA合成 | 第70页 |
| ·PCR扩增 | 第70-71页 |
| ·PCR产物纯化 | 第71页 |
| ·PCR产物克隆与筛选 | 第71页 |
| ·CP和HC-Pro基因的序列测定与分析 | 第71-72页 |
| 2.结果及分析 | 第72-74页 |
| ·CP和HC-Pro基因的RT-PCR扩增 | 第72页 |
| ·CP和HC-Pro基因的序列测定 | 第72页 |
| ·TuMV的CP基因序列同源性分析 | 第72-73页 |
| ·TuMV中国分离物的CP基因序列同源性比较 | 第72-73页 |
| ·TuMV国内外分离物的CP基因序列比较 | 第73页 |
| ·TuMV国内外分离物的HC-Pro基因序列比较 | 第73-74页 |
| 3.讨论 | 第74-89页 |
| 参考文献 | 第89-100页 |
| 附录A 常用生化及分子生物学试剂与仪器 | 第100-101页 |
| 附录B 常用缓冲液及培养基配方 | 第101-104页 |
