| 缩略词 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 前言 | 第15-19页 |
| 第一部分 恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶融合蛋白的表达、纯化及免疫原性的鉴定 | 第19-28页 |
| 材料和方法 | 第19-23页 |
| 一、 材料 | 第19页 |
| 二、 实验方法 | 第19-23页 |
| (一) GDH融合蛋白的表达 | 第19-20页 |
| (二) 包涵体的提取 | 第20页 |
| (三) 包涵体的溶解变性 | 第20页 |
| (四) 包涵体的复性 | 第20-21页 |
| 1 稀释复性 | 第20页 |
| 2 透稀复性 | 第20-21页 |
| 3 分子筛Sephacryl S-200柱层析复性 | 第21页 |
| (五) 浊度分析 | 第21页 |
| (六) 复性产物的柱层析纯化 | 第21-22页 |
| 1 GST亲合层析 | 第21页 |
| 2 离子交换层析 | 第21-22页 |
| (七) 纯化产物的免疫原性鉴定 | 第22-23页 |
| 1 免疫血清的制备 | 第22页 |
| 2 免疫印迹 | 第22-23页 |
| 结果 | 第23-26页 |
| 一、 GDH的表达和包涵体的制备 | 第23页 |
| 二、 复性 | 第23-24页 |
| (一) 稀释复性 | 第23-24页 |
| (二) 透稀复性 | 第24页 |
| (三) Sephacryl S-200柱层析复性 | 第24页 |
| 三、 纯化 | 第24-25页 |
| (一) GST亲合层析纯化 | 第24页 |
| (二) 离子交换层析纯化 | 第24-25页 |
| 四、 Western-Blot | 第25-26页 |
| 讨论 | 第26-27页 |
| 小结 | 第27-28页 |
| 第二部分 恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及免疫原性的鉴定 | 第28-39页 |
| 材料和方法 | 第28-31页 |
| 一、 材料 | 第28页 |
| 二、 实验方法 | 第28-31页 |
| (一) 重组质粒pET23(a)／GDH的构建 | 第28-29页 |
| 1 质粒DNA的制备 | 第28页 |
| 2 目的基因的酶切、回收 | 第28-29页 |
| 3 目的基因与载体的连接 | 第29页 |
| 4 感受态的制备 | 第29页 |
| 5 转化 | 第29页 |
| 6 酶切鉴定 | 第29页 |
| 7 基因序列测定 | 第29页 |
| (二) GDH基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第29-30页 |
| (三) 超声破菌 | 第30页 |
| (四) 表达产物的纯化 | 第30页 |
| 1 Source-Q柱层析纯化 | 第30页 |
| 2 Source-S柱层析纯化 | 第30页 |
| (五) 纯化产物的免疫原性鉴定 | 第30-31页 |
| 1 免疫血清的制备 | 第30页 |
| 2 免疫印迹 | 第30-31页 |
| 结果 | 第31-37页 |
| 一、 重组质粒的构建与鉴定 | 第31-34页 |
| 二、 重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第34-35页 |
| 三、 表达产物的纯化 | 第35-36页 |
| 四、 Western-blot | 第36-37页 |
| 讨论 | 第37-38页 |
| 小结 | 第38-39页 |
| 第三部分 单克隆抗体的制备及其鉴定 | 第39-46页 |
| 材料和方法 | 第39-42页 |
| 一、 材料 | 第39页 |
| 二、 实验方法 | 第39-42页 |
| (一) 动物免疫 | 第39-40页 |
| (二) 细胞融合 | 第40页 |
| (三) 阳性克隆的筛选与亚克隆化 | 第40页 |
| (四) 诱生腹水及抗体的纯化 | 第40-41页 |
| (五) 单克隆抗体Ig类与亚类鉴定 | 第41-42页 |
| 结果 | 第42-44页 |
| 一、 杂交瘤细胞株的建立 | 第42页 |
| 二、 抗体的纯化 | 第42-43页 |
| 三、 单克隆抗体Ig类与亚类 | 第43页 |
| 四、 抗体亲和力测定 | 第43-44页 |
| 讨论 | 第44-45页 |
| 小结 | 第45-46页 |
| 第四部分 单克隆抗体的胶体金标记、配对筛选及胶体金免疫层析法的初步建立 | 第46-54页 |
| 材料和方法 | 第46-49页 |
| 一、 材料 | 第46页 |
| 二、 实验方法 | 第46-49页 |
| (一) 抗体的纯化 | 第46-47页 |
| (二) 胶体金的制备 | 第47页 |
| (三) 胶体金标记抗体 | 第47页 |
| (四) 包被抗体 | 第47页 |
| (五) 点金标抗体 | 第47页 |
| (六) 检测试纸条的组装和压片 | 第47页 |
| (七) 检测方法及结果判定 | 第47页 |
| (八) 配对筛选检测 | 第47-48页 |
| (九) 疟疾血样的检测 | 第48页 |
| (十) 灵敏度的检测 | 第48页 |
| (十一) 稳定性的检测 | 第48-49页 |
| 结果 | 第49-52页 |
| 一、 抗体纯化后的浓度 | 第49页 |
| 二、 抗体标记后的OD_(540)值 | 第49页 |
| 三、 配对筛选检测的结果 | 第49-50页 |
| 四、 疟疾血样的检测 | 第50-51页 |
| 五、 灵敏度的检测 | 第51页 |
| 六、 稳定性的检测 | 第51-52页 |
| 讨论 | 第52-53页 |
| 小结 | 第53-54页 |
| 总结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 综述一 | 第62-70页 |
| 综述二 | 第70-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附录1: 硕士期间论文发表情况 | 第77-79页 |
