| 缩略语表 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| Ⅰ 前言 | 第10页 |
| Ⅱ 文献综述 | 第10-26页 |
| ·植物抗真菌基因工程研究现状 | 第10-13页 |
| ·抗真菌病基因的克隆 | 第11-13页 |
| ·几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因 | 第11-12页 |
| ·核糖体失活蛋白基因 | 第12页 |
| ·渗透蛋白基因 | 第12页 |
| ·病原真菌酶的抑制蛋白基因 | 第12页 |
| ·植保素基因 | 第12-13页 |
| ·增强细胞壁强度酶的基因 | 第13页 |
| ·抗真菌基因转化植物研究现状 | 第13页 |
| ·芪类植保素研究进展 | 第13-19页 |
| ·芪类物质的发现 | 第14页 |
| ·芪类物质的种类、毒性、药理作用及理化性质 | 第14-15页 |
| ·植物体内芪类植保素的诱导及合成 | 第15页 |
| ·芪合酶基因及其表达调控 | 第15-16页 |
| ·芪合酶蛋白的研究 | 第16-17页 |
| ·转芪合酶基因植物及其抗病性研究 | 第17-19页 |
| ·植物遗传转化技术在玉米基因工程中的应用 | 第19-24页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第19-21页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化原理 | 第19-20页 |
| ·影响农杆菌转化效率的因素 | 第20-21页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化技术在玉米上的应用 | 第21页 |
| ·基因枪法在玉米遗传转化中的应用 | 第21-23页 |
| ·基因枪法转化的原理及分类 | 第21页 |
| ·影响基因枪转化玉米效率的因素 | 第21-23页 |
| ·基因枪法在玉米遗传转化中的应用 | 第23页 |
| ·其它转化方法在玉米上的应用 | 第23-24页 |
| ·电激法 | 第23页 |
| ·PEG法 | 第23-24页 |
| ·外源基因的表达 | 第24-26页 |
| ·外源基因的瞬时表达 | 第24页 |
| ·外源基因的稳定表达 | 第24页 |
| ·提高外源基因在植物体内表达的策略 | 第24-26页 |
| ·影响因素 | 第24-25页 |
| ·启动子的选择 | 第25页 |
| ·增强表达的序列选择 | 第25-26页 |
| ·转化受体的筛选研究 | 第26页 |
| Ⅲ 研究目标、基本思路和技术路线 | 第26-27页 |
| Ⅳ 材料和方法 | 第27-43页 |
| ·材料 | 第27-30页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·菌种和质粒 | 第27页 |
| ·工具酶及分子生物学试剂 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·玉米组织培养基 | 第28页 |
| ·细菌培养基 | 第28页 |
| ·溶液及其配制 | 第28-30页 |
| ·玉米DNA提取溶液 | 第28页 |
| ·花生RNA提取缓冲液 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌质粒提取缓冲液 | 第29页 |
| ·TE缓冲液 | 第29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第29页 |
| ·SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳溶液及配制 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-43页 |
| ·引物设计及合成 | 第30页 |
| ·本实验通用方法 | 第30-35页 |
| ·玉米基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第31-32页 |
| ·小量碱法提取质粒 | 第32页 |
| ·花生总RNA提取 | 第32-33页 |
| ·碱裂解法大量制备并纯化大肠杆菌质粒DNA | 第33-34页 |
| ·金粉的制备 | 第34页 |
| ·制备子弹 | 第34页 |
| ·基因枪轰击步骤 | 第34-35页 |
| ·玉米 ubi－1启动子及其5’UTR的克隆及启动子活性检测 | 第35-38页 |
| ·玉米 ubi－1启动子及其5’UTR | 第35-36页 |
| ·中间载体pBIUB的构建 | 第36-37页 |
| ·载体pBIUG构建 | 第37页 |
| ·连接并转化大肠杆菌DH5α | 第37页 |
| ·酶切检测 | 第37页 |
| ·玉米ubi-1启动子活性检测 | 第37-38页 |
| ·芪合酶基因(Res)的克隆 | 第38-40页 |
| ·花生叶片总RNA的提取 | 第38页 |
| ·RT－PCR | 第38-39页 |
| ·植物表达载体pBIUA的构建 | 第39-40页 |
| ·Res原核表达 | 第40-41页 |
| ·原核表达载体pETA的构建 | 第40-41页 |
| ·目的蛋白的诱导表达及检测 | 第41页 |
| ·玉米遗传转化 | 第41-42页 |
| ·幼胚的诱导培养 | 第41-42页 |
| ·愈伤组织的继代培养 | 第42页 |
| ·基因枪法转化玉米Ⅱ型愈伤组织 | 第42页 |
| ·植株的再生 | 第42页 |
| ·再生苗的移栽 | 第42-43页 |
| Ⅴ 结果与分析 | 第43-60页 |
| ·ubi-1启动子及玉米泛素蛋白基因5’端非翻译区及第一个内含子的克隆 | 第43-47页 |
| ·玉米基因组DNA的提取 | 第43页 |
| ·PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·pGEMUB检测及测序 | 第44-47页 |
| ·中间载体pBIUB的构建及检测 | 第47-48页 |
| ·Ubi启动子活性检测 | 第48-49页 |
| ·pBIUG的构建及检测 | 第48-49页 |
| ·基因枪法转化洋葱表皮细胞及荧光检测 | 第49页 |
| ·Res基因的克隆 | 第49-53页 |
| ·花生叶片总RNA的提取 | 第49页 |
| ·Res基因的克隆 | 第49-50页 |
| ·pGEMAR构建及测序 | 第50-53页 |
| ·pBIUA构建检测 | 第53页 |
| ·原核表达载体pETAR的构建及检测 | 第53-54页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第54-55页 |
| ·玉米再生体系的研究 | 第55-58页 |
| ·愈伤组织诱导的影响因素 | 第55-56页 |
| ·胚龄对胚性愈伤组织诱导率的影响 | 第55页 |
| ·基因型对胚性愈伤组织诱导率的影响 | 第55-56页 |
| ·2,4-D浓度对胚性愈伤组织诱导的影响 | 第56页 |
| ·愈伤组织继代的影响因素 | 第56-57页 |
| ·继代时间的影响 | 第56-57页 |
| ·生长素浓度的影响 | 第57页 |
| ·愈伤组织选择压确定 | 第57-58页 |
| ·6-BA浓度确定 | 第58页 |
| ·基因枪转化体系的优化 | 第58-60页 |
| ·轰击次数对转化效率的影响 | 第58-59页 |
| ·轰击时金粉用量对转化效率的影响 | 第59-60页 |
| ·轰击距离对转化效率的影响 | 第60页 |
| ·预培养及恢复培养对转化效率的影响 | 第60页 |
| Ⅵ 讨论 | 第60-64页 |
| Ⅶ 小结 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 图 版 | 第73-75页 |
| 致 谢 | 第75页 |