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产单核细胞李斯特菌的快速检测与分子亚分型研究

中文摘要第1-6页
英文摘要第6-11页
目录第11-16页
符号说明第16-18页
第一章 文献综述第18-48页
 1 毒力与致病作用第18-23页
   ·Lm毒力因子及其与宿主细胞相互作用第18-20页
     ·李斯特菌溶血素第18-19页
     ·与Lm侵入细胞,胞内运动以及胞间转移有关的毒力因子第19-20页
   ·实验室毒力检测:动物模型与细胞模型第20-22页
     ·小鼠模型第20-21页
     ·a 胃肠道途径感染第20-21页
     ·b 神经系统感染模型第21页
     ·其他动物模型第21-22页
     ·细胞模型第22页
   ·环境压力与毒力第22-23页
     ·寒冷及植物分子对毒力基因表达的抑制第22-23页
     ·对缺铁的反应第23页
     ·酸耐受与酸压力第23页
 2 食品中Lm的检测第23-27页
   ·传统分离鉴定法第23-25页
   ·免疫学检测方法第25-26页
   ·核酸检测方法第26-27页
 3 Lm的亚分型方法第27-31页
   ·Lm的传统表型亚分型法第28-29页
     ·血清分型第28页
     ·噬菌体分型第28页
     ·多区带酶电泳分型(MEE)第28-29页
   ·Lm的遗传亚分型第29-30页
     ·脉冲场凝胶电泳第29-30页
     ·核糖体分型第30页
   ·以DNA序列为基础的亚分型第30-31页
 4 Lm分子亚分型的应用第31-34页
   ·食源性疾病的监控和爆发的追踪第31-33页
   ·不同致病性Lm的区分及对其进化树特征的描述第33-34页
 5 结语第34-35页
 6 参考文献第35-48页
第二章 产单核细胞李斯特菌的PCR快速检测方法的建立第48-61页
 1 材料与方法第49-52页
   ·菌株第49-50页
   ·细菌DNA的提取第50-51页
     ·溶菌酶-蛋白酶K法第50-51页
     ·热裂解法第51页
     ·反复冻融法第51页
   ·PCR引物和扩增条件第51页
   ·灵敏度实验第51页
   ·DNA模板检测限实验第51-52页
   ·人工污染模拟实验第52页
   ·人工干扰实验第52页
 2 结果第52-56页
   ·PCR检测结果第52页
   ·三种DNA模板提取方法PCR结果的比较第52-54页
   ·DNA模板检测限实验结果第54页
   ·模拟样品的检测结果第54-55页
   ·人工干扰实验结果第55-56页
 3 讨论第56-57页
 4 参考文献第57-61页
第三章 市售食品及其环境污水中产单核细胞李斯特菌污染率调查研究第61-76页
 1 材料与方法第63-64页
   ·食品样品的采集第63页
     ·生食样品第63页
     ·熟食样品第63页
   ·生猪屠宰场的新鲜猪肉样品第63-64页
   ·超市熟食样品第64页
   ·Lm的分离第64页
   ·Lm的PCR鉴定第64页
 2 结果第64-70页
   ·扬州地区四个农贸市场生食样品中Lm污染率第64-66页
   ·扬州地区四大市场熟食样品中Lm的污染率第66-68页
   ·扬州市区某一生猪屠宰场猪肉中Lm污染率及其与四大市场生猪肉Lm污染率的比较第68-69页
   ·扬州市区两超市熟食样品Lm污染率第69-70页
 3 讨论第70-72页
 4 参考文献第72-76页
第四章 RAPD分析在产单核细胞李斯特菌分子亚分型中的应用第76-92页
 1 材料与方法第77-79页
   ·菌株来源及培养第77页
   ·Lm血清型分析第77-78页
   ·Lm DNA的提取第78页
   ·RAPD分析第78-79页
     ·随机引物序列第78页
     ·PCR扩增程序第78-79页
     ·RAPD重复性实验第79页
     ·RAPD指纹分析第79页
 2 结果第79-86页
   ·血清型鉴定结果第79页
   ·RAPD结果的可重复性第79-82页
   ·RAPD指纹分析第82-85页
   ·RTE食品中Lm污染源的追踪第85-86页
   ·脑膜炎病人Lm感染菌株与食品中Lm菌株RAPD组合型的关系第86页
 3 讨论第86-88页
 4 参考文献第88-92页
第五章 基于actA基因的产单核细胞李斯特菌遗传谱系研究第92-113页
 1 材料与方法第93-98页
   ·Lm菌株第93-96页
   ·actA基因3’末端的PCR扩增第96-97页
   ·PCR产物的序列测定第97页
   ·遗传进化树的构建第97页
   ·Lm对Caco-2细胞的侵袭及其在Caco-2细胞内增殖实验第97-98页
     ·Caco-2细胞、Lm菌株第97-98页
     ·Lm对Caco-2细胞的侵袭实验第98页
     ·Lm在Caco-2细胞内增殖的实验第98页
 2 结果第98-104页
   ·Lm中国分离株的遗传进化与谱系分析第98-99页
   ·中国与美国Lm分离株遗传谱系与actA基因型比较第99页
   ·Lm中国分离株与美国分离株actA基因3’末段核苷酸序列与蛋白质序列的变化第99-103页
   ·两个谱系细菌对Caco-2细胞的侵袭及其在Caco-2细胞内增殖实验结果第103-104页
 3 讨论第104-107页
 4 参考文献第107-113页
致谢第113-114页
攻读硕士学位期间发表的论文目录第114页

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