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高产耐热β-葡萄糖苷酶的黑曲霉菌株选育及其基因克隆

缩略词第1-5页
中文摘要第5-6页
ABSTRACT第6-13页
第一章 绪论第13-26页
   ·纤维素与纤维素酶第13页
   ·β-葡萄糖苷酶的研究概况第13-23页
     ·β-葡萄糖苷酶的来源第13-14页
     ·β-葡萄糖苷酶的分类第14-15页
     ·β-葡萄糖苷酶的催化机制第15页
     ·β-葡萄糖苷酶的酶学性质第15-17页
       ·l β-葡萄糖苷酶的相对分子量第15-16页
       ·β-葡萄糖苷酶的等电点,最适 pH 及 pH 稳定性第16页
       ·β-葡萄糖苷酶的最适温度及热稳定性第16-17页
       ·β-葡萄糖苷酶的底物特异性第17页
       ·β-葡萄糖苷酶的抑制和激活第17页
     ·β-葡萄糖苷酶的测定方法第17-18页
       ·分光光度法第17-18页
       ·荧光法第18页
       ·电化学法第18页
     ·β-葡萄糖苷酶的分离纯化第18-19页
     ·β-葡萄糖苷酶的固定化技术第19-20页
     ·β-葡萄糖苷酶的应用第20-22页
       ·β-葡萄糖苷酶在工业中的应用第20页
       ·β-葡萄糖苷酶在农业中的应用第20-21页
       ·β-葡萄糖苷酶在医学领域中的应用第21页
       ·β-葡萄糖苷酶作为风味酶的应用第21-22页
     ·β-葡萄糖苷酶的分子生物学研究第22-23页
   ·黑曲霉第23-24页
   ·研究的目的及内容第24-26页
     ·研究目的、意义第24页
     ·研究内容第24-25页
     ·技术路线第25-26页
第二章 响应面法优化黑曲霉 3.2130 产β-葡萄糖苷酶发酵条件的研究第26-47页
   ·材料与方法第26-29页
     ·试验材料第26-27页
       ·试验菌株第26页
       ·培养基第26-27页
       ·主要试剂第27页
     ·试验仪器第27页
     ·试验方法第27-29页
       ·酶活的测定第27页
       ·黑曲霉 3.2130 产酶曲线的测定第27-28页
       ·营养因素筛选第28页
       ·发酵培养基的单因素试验第28页
       ·发酵工艺条件的单因素试验第28页
       ·发酵培养基的响应面试验设计第28页
       ·发酵工艺条件的响应面试验设计第28-29页
   ·结果与分析第29-46页
     ·β-葡萄糖苷酶的活力计算第29页
     ·黑曲霉 3.2130 最佳产酶时间的确定第29-30页
     ·营养因素对产酶活力的影响第30-33页
       ·碳源对产酶活力的影响第30-31页
       ·氮源对产酶活力的影响第31页
       ·诱导物对产酶活力的影响第31-32页
       ·表面活性剂对产酶活力的影响第32-33页
       ·刺激剂对产酶活力的影响第33页
     ·培养基单因素确定第33-36页
       ·麸皮的用量对产酶活力的影响第33-34页
       ·硫酸铵+蛋白胨的用量对产酶活力的影响第34-35页
       ·水杨苷+CMC 的用量对产酶活力的影响第35页
       ·初始 pH 对产酶活力的影响第35-36页
     ·工艺条件单因素确定第36-38页
       ·装液量第36-37页
       ·接种量第37-38页
       ·摇床转速第38页
     ·响应面分析法优化培养基第38-42页
       ·二次回归拟合及方差分析第38-41页
       ·试验结果分析与优化第41-42页
       ·模型的验证第42页
     ·响应面分析法优化工艺条件第42-46页
       ·二次回归拟合及方差分析第42-44页
       ·试验结果分析与优化第44-46页
       ·模型的验证第46页
   ·本章小结第46-47页
第三章 黑曲霉原生质体 DES 诱变酸性蛋白酶缺陷菌株选育第47-59页
   ·材料与方法第47-50页
     ·试验材料第47-48页
       ·试验菌株第47-48页
       ·培养基第48页
       ·主要试剂第48页
     ·试验仪器第48页
     ·试验方法第48-50页
       ·酸性蛋白酶活力测定第48页
       ·β-葡萄糖苷酶活力测定第48-49页
       ·原生质体的制备方法第49页
       ·原生质体的再生第49页
       ·硫酸二乙酯(DES)诱变处理第49页
       ·平板初筛第49-50页
       ·摇瓶培养复筛第50页
   ·结果与分析第50-58页
     ·蛋白酶活力计算第50-51页
     ·原生质体的释放第51-53页
       ·酶配比对原生质体的影响第51页
       ·酶解时间对原生质体的影响第51-53页
       ·促进剂对原生质体的影响第53页
     ·酶解条件的正交试验第53-54页
     ·黑曲霉原生质体诱变条件结果分析第54-56页
       ·诱变时间对黑曲霉原生质体的致死效应的结果分析第54-55页
       ·诱变剂用量对黑曲霉原生质体的致死效应的结果分析第55-56页
       ·原生质体稀释倍数的致死效应的结果分析第56页
     ·诱变条件的正交试验第56-58页
     ·黑曲霉原生质体诱变后酶活性分析第58页
   ·本章小结第58-59页
第四章 黑曲霉 3.316β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性研究第59-72页
   ·材料与方法第59-62页
     ·试验材料第59-60页
       ·试验菌株第59页
       ·培养基第59-60页
       ·主要试剂第60页
     ·试验仪器第60页
     ·试验方法第60-62页
       ·β-葡萄糖苷酶活力测定第60页
       ·蛋白质含量的测定第60页
       ·硫酸铵分级沉淀第60-61页
       ·乙醇分级沉淀第61页
       ·DEAE-Sephadex A-50 阴离子交换层析分离纯化β-葡萄糖苷 酶第61页
       ·Sephadex G-100 凝胶层析分离纯化β-葡萄糖苷酶第61页
       ·β-葡萄糖苷酶电泳纯度鉴定第61页
       ·β-葡萄糖苷酶酶学性质的测定[114-118]第61-62页
   ·结果与分析第62-71页
     ·两种沉淀方法的比较第62-63页
     ·β-葡萄糖苷酶的分离纯化第63-65页
       ·DEAE-Sephadex A-50 阴离子交换层析分离β-葡萄糖苷酶第63-64页
       ·Sephadex G-100 凝胶层析分离β-葡萄糖苷酶第64页
       ·β-葡萄糖苷酶纯化总表第64-65页
     ·β-葡萄糖苷酶的电泳纯度鉴定及分子量的测定第65-67页
       ·β-葡萄糖苷酶电泳纯度鉴定第65-66页
       ·β-葡萄糖苷酶分子量的测定第66-67页
     ·β-葡萄糖苷酶酶学性质研究第67-71页
       ·β-葡萄糖苷酶最适反应温度第67页
       ·β-葡萄糖苷酶的热稳定性第67-68页
       ·β-葡萄糖苷酶的最适 pH 值第68页
       ·β-葡萄糖苷酶的 pH 稳定性第68-69页
       ·底物浓度对β-葡萄糖苷酶活力的影响第69页
       ·金属离子、EDTA 对β-葡萄糖苷酶活力的影响第69-70页
       ·β-葡萄糖苷酶动力学常数-米氏常数 Km第70-71页
   ·本章小结第71-72页
第五章 黑曲霉 3.316bgl 基因的克隆及序列分析第72-85页
   ·材料与方法第72-75页
     ·试验材料第72-73页
       ·菌种、克隆载体第72页
       ·培养基第72-73页
       ·主要试剂第73页
     ·试验仪器第73页
     ·试验方法第73-75页
       ·引物设计第73页
       ·黑曲霉的种子培养及样品处理第73页
       ·黑曲霉基因组 DNA 的提取第73-74页
       ·PCR 扩增第74页
       ·重组质粒的构建与鉴定第74页
       ·基因测序与分析验证第74-75页
   ·结果与分析第75-84页
     ·基因组 DNA 提取第75页
     ·bgl 基因的扩增第75-76页
     ·重组菌的筛选与检测第76页
     ·序列测定与分析第76-78页
     ·bgl 基因 cDNA 序列的推导与分析第78-84页
       ·黑曲霉 3.316bgl 蛋白的氨基酸序列分析第81-82页
       ·黑曲霉 3.316bgl 蛋白信号肽分析第82-83页
       ·黑曲霉 3.316bgl 蛋白二、三级结构预测与分析第83-84页
   ·本章小结第84-85页
第六章 全文总结第85-87页
   ·结论第85-86页
   ·创新点第86页
   ·后续试验第86-87页
参考文献第87-95页
发表论文和参加科研情况说明第95-96页
致谢第96页

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