| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-16页 |
| ·围食膜的简介及其分类 | 第10页 |
| ·围食膜组分 | 第10-11页 |
| ·围食膜功能 | 第11-12页 |
| ·围食膜蛋白 | 第12页 |
| ·围食膜—潜在的害虫防治靶标位点 | 第12-14页 |
| ·几丁质结合蛋白 | 第14-15页 |
| ·本研究目的与意义 | 第15-16页 |
| 第二章 甜菜夜蛾几丁质结合蛋白在酵母中的表达 | 第16-29页 |
| ·材料 | 第16-19页 |
| ·菌株与质粒 | 第16页 |
| ·试剂和溶液 | 第16-18页 |
| ·培养基 | 第18-19页 |
| ·方法 | 第19-25页 |
| ·引物设计 | 第19页 |
| ·CTAB 法提取质粒 | 第19-20页 |
| ·PCR 及酶切产物的纯化 | 第20页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第20页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第20-21页 |
| ·重组质粒pPICK9k-△s-secbp66 的构建 | 第21页 |
| ·重组质粒pPIC9k-△s-secbp66 的鉴定及线性化 | 第21页 |
| ·缺陷型毕赤酵母的筛选 | 第21-22页 |
| ·酵母菌 GS115 感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·重组质粒 pPIC9k-secbp66 电击转化 GS115 感受态细胞 | 第22页 |
| ·重组酵母菌株的初步筛选 | 第22页 |
| ·重组菌株的抗性筛选 | 第22-23页 |
| ·重组菌株突变型的鉴定 | 第23页 |
| ·重组菌株的PCR 鉴定 | 第23页 |
| ·重组酵母菌株的诱导表达 | 第23页 |
| ·蛋白表达的检测 | 第23-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-28页 |
| ·SeCBP66 的消化酶作用位点分析 | 第25页 |
| ·△s-secbp66 基因的扩增 | 第25页 |
| ·重组质粒pPICK9k-△s-secbp66 的构建及鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组酵母菌株的表型鉴定 | 第26页 |
| ·重组酵母菌株的PCR 鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组菌株蛋白表达的检测 | 第27-28页 |
| ·结论 | 第28-29页 |
| 第三章 几丁质结合蛋白SeCBP66 在昆虫细胞系中的表达及其生化特性分析 | 第29-46页 |
| ·材料 | 第29-31页 |
| ·供试昆虫与昆虫细胞系 | 第29页 |
| ·菌株和质粒 | 第29页 |
| ·培养基与筛选试剂 | 第29-30页 |
| ·试剂和溶液 | 第30-31页 |
| ·仪器 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-40页 |
| ·secbp66 基因扩增引物的设计 | 第31页 |
| ·CTAB 法提取质粒，PCR 产物纯化，感受态细胞制备及其转化 | 第31页 |
| ·secbp66 基因的扩增 | 第31-32页 |
| ·重组质粒pFast-secbp66 的构建 | 第32页 |
| ·重组子的筛选及鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组Bacmid 的构建及鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组质粒 pFast-secbp66 转化 E.coli DH10Bac | 第34页 |
| ·重组Bacmid-secbp66 的提取 | 第34-35页 |
| ·重组Bacmid-secbp66 的鉴定 | 第35页 |
| ·重组 Bacmid-secbp66 的纯化 | 第35-36页 |
| ·重组Bacmid-secbp66 转染昆虫细胞系Sf9 | 第36页 |
| ·P1 viral stock 的分离 | 第36-37页 |
| ·P1 viral stock 的扩增 | 第37页 |
| ·P2 病毒株病毒滴度的测定 | 第37页 |
| ·SeCBP66 蛋白的表达 | 第37-38页 |
| ·SeCBP66 蛋白表达条件的优化 | 第38页 |
| ·再生几丁质的制备 | 第38页 |
| ·几丁质结合活性测定 | 第38-39页 |
| ·SeCBP66 特异抗体的制备 | 第39页 |
| ·SeCBP66 蛋白在甜菜夜蛾幼虫组织中的免疫定位 | 第39页 |
| ·重组蛋白 SeCBP66 的体外消化 | 第39-40页 |
| ·结果和分析 | 第40-45页 |
| ·pBluescrip-secbp66 质粒的提取 | 第40页 |
| ·secbp66 基因的PCR 扩增 | 第40页 |
| ·重组质粒pFast-secbp66 的构建及验证 | 第40-41页 |
| ·重组Bacmid 的鉴定 | 第41页 |
| ·SeCBP66 蛋白的表达 | 第41-42页 |
| ·SeCBP66 蛋白几丁质结合活性检测 | 第42-43页 |
| ·SeCBP66 蛋白特异抗体的检测 | 第43页 |
| ·SeCBP66 蛋白在甜菜夜蛾幼虫组织中的免疫定位 | 第43-44页 |
| ·Trypsin 对SeCBP66 蛋白的体外消化 | 第44-45页 |
| ·结论 | 第45-46页 |
| 讨论 | 第46-47页 |
| 全文结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录 | 第53-55页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第55-56页 |
| 作者简历 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
