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酵母pac-1基因的克隆、原核表达及其植物表达载体的构建

中文摘要第1-5页
英文摘要第5-6页
第一章 前言第6-21页
 抗植物病毒病基因工程研究现状第6-21页
  1. 病原来源的抗性策略,即PDR第7-14页
   1.1 病毒外壳蛋白(CP)基因第7-9页
   1.2 病毒的功能蛋白第9-10页
   1.3 核酸介导的抗性第10-14页
  2. 寄主基因来源的抗性策略第14页
  3. 病毒和植物以外的基因来源的抗性策略第14-17页
   3.1 5-腺苷高半胱氨酸水解酶第15页
   3.2 病毒特异的单克隆抗体第15页
   3.3 2-5A酸合成酵素和核糖核酸酶介导的抗性第15-16页
   3.4 双链RNA分解酶介导的抗性第16-17页
  4. 展望及存在的问题第17-21页
第二章 pac-1基因的克隆与序列分析第21-31页
 1. 材料第21-22页
 2. 方法第22-28页
  2.1 提取酵母基因组DNA第22-23页
  2.2 pac-1基因的PCR扩增第23页
  2.3 pac-1基因的克隆第23-28页
  2.4 克隆到载体上的PCR产物序列分析第28页
 3. 结果与分析第28-29页
  3.1 酵母基因组总DNA的提取第28页
  3.2 pac-1基因的PCR扩增第28页
  3.3 pac-1基因PCR产物的克隆与重组质粒的酶切鉴定第28-29页
  3.4 pac-1基因序列测定与分析第29页
 4. 小结与讨论第29-31页
第三章 pac-1基因的原核表达及表达产物酶活性测定第31-41页
 1. 材料第31-32页
 2. 方法第32-38页
  2.1 酵母pac-1基因原核表达载体的构建第32-33页
  2.2 将重组质粒pEmu-pac-1基因转化受体菌BL21(DE3)pLysS第33-34页
  2.3 pac-1基因的表达第34页
  2.4 检测pac-1基因的表达第34-36页
  2.5 诱导表达产物分析第36页
  2.6 pac-1表达产物的活性测定第36-38页
 3. 结果与分析第38-39页
  3.1 酵母pac-1基因原核表达载体的构建第38页
  3.2 pac-1基因的表达及表达产物的SDS-PAGE分析第38-39页
  3.3 pac-1基因诱导表达细胞内存在形式第39页
  3.4 上清总蛋白浓度的测定第39页
  3.5 pac-1基因表达产物的酶活性测定第39页
 4. 小结与讨论第39-41页
第四章 pac-1基因植物表达载体的构建第41-47页
 1. 材料第41-42页
 2. 方法第42-44页
  2.1 pac-1~(#2)基因的PCR扩增第42页
  2.2 植物表达载体pEmu-pac-1~(#2)构建第42-43页
  2.3 pEmu-pac-1~(#2)重组质粒的大量制备第43-44页
  2.4 小麦专化第44页
  2.5 植物表达载体pBI-121-pac-1~(#2)的构建第44页
 3. 结果与分析第44-45页
  3.1 pac-1~(#2)基因的PCR扩增第44-45页
  3.2 pEmu-pac-1~(#2)重组质粒的构建第45页
  3.3 pac-1~(#2)基因测序第45页
  3.4 转化小麦第45页
  3.5 pBI-121-pac-1~(#2)重组质粒的构建第45页
 4. 小结与讨论第45-47页
第五章 结论第47-64页
参考文献第64-70页
致谢第70页

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