中文摘要 | 第1-5页 |
英文摘要 | 第5-6页 |
第一章 前言 | 第6-21页 |
抗植物病毒病基因工程研究现状 | 第6-21页 |
1. 病原来源的抗性策略,即PDR | 第7-14页 |
1.1 病毒外壳蛋白(CP)基因 | 第7-9页 |
1.2 病毒的功能蛋白 | 第9-10页 |
1.3 核酸介导的抗性 | 第10-14页 |
2. 寄主基因来源的抗性策略 | 第14页 |
3. 病毒和植物以外的基因来源的抗性策略 | 第14-17页 |
3.1 5-腺苷高半胱氨酸水解酶 | 第15页 |
3.2 病毒特异的单克隆抗体 | 第15页 |
3.3 2-5A酸合成酵素和核糖核酸酶介导的抗性 | 第15-16页 |
3.4 双链RNA分解酶介导的抗性 | 第16-17页 |
4. 展望及存在的问题 | 第17-21页 |
第二章 pac-1基因的克隆与序列分析 | 第21-31页 |
1. 材料 | 第21-22页 |
2. 方法 | 第22-28页 |
2.1 提取酵母基因组DNA | 第22-23页 |
2.2 pac-1基因的PCR扩增 | 第23页 |
2.3 pac-1基因的克隆 | 第23-28页 |
2.4 克隆到载体上的PCR产物序列分析 | 第28页 |
3. 结果与分析 | 第28-29页 |
3.1 酵母基因组总DNA的提取 | 第28页 |
3.2 pac-1基因的PCR扩增 | 第28页 |
3.3 pac-1基因PCR产物的克隆与重组质粒的酶切鉴定 | 第28-29页 |
3.4 pac-1基因序列测定与分析 | 第29页 |
4. 小结与讨论 | 第29-31页 |
第三章 pac-1基因的原核表达及表达产物酶活性测定 | 第31-41页 |
1. 材料 | 第31-32页 |
2. 方法 | 第32-38页 |
2.1 酵母pac-1基因原核表达载体的构建 | 第32-33页 |
2.2 将重组质粒pEmu-pac-1基因转化受体菌BL21(DE3)pLysS | 第33-34页 |
2.3 pac-1基因的表达 | 第34页 |
2.4 检测pac-1基因的表达 | 第34-36页 |
2.5 诱导表达产物分析 | 第36页 |
2.6 pac-1表达产物的活性测定 | 第36-38页 |
3. 结果与分析 | 第38-39页 |
3.1 酵母pac-1基因原核表达载体的构建 | 第38页 |
3.2 pac-1基因的表达及表达产物的SDS-PAGE分析 | 第38-39页 |
3.3 pac-1基因诱导表达细胞内存在形式 | 第39页 |
3.4 上清总蛋白浓度的测定 | 第39页 |
3.5 pac-1基因表达产物的酶活性测定 | 第39页 |
4. 小结与讨论 | 第39-41页 |
第四章 pac-1基因植物表达载体的构建 | 第41-47页 |
1. 材料 | 第41-42页 |
2. 方法 | 第42-44页 |
2.1 pac-1~(#2)基因的PCR扩增 | 第42页 |
2.2 植物表达载体pEmu-pac-1~(#2)构建 | 第42-43页 |
2.3 pEmu-pac-1~(#2)重组质粒的大量制备 | 第43-44页 |
2.4 小麦专化 | 第44页 |
2.5 植物表达载体pBI-121-pac-1~(#2)的构建 | 第44页 |
3. 结果与分析 | 第44-45页 |
3.1 pac-1~(#2)基因的PCR扩增 | 第44-45页 |
3.2 pEmu-pac-1~(#2)重组质粒的构建 | 第45页 |
3.3 pac-1~(#2)基因测序 | 第45页 |
3.4 转化小麦 | 第45页 |
3.5 pBI-121-pac-1~(#2)重组质粒的构建 | 第45页 |
4. 小结与讨论 | 第45-47页 |
第五章 结论 | 第47-64页 |
参考文献 | 第64-70页 |
致谢 | 第70页 |