| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 0 前言 | 第16-31页 |
| ·纤维素 | 第16-18页 |
| ·纤维素的来源 | 第16页 |
| ·纤维素的结构与分类 | 第16-17页 |
| ·纤维素的应用 | 第17-18页 |
| ·纤维素酶 | 第18-29页 |
| ·纤维素酶的多样性 | 第18页 |
| ·纤维素酶的来源 | 第18-19页 |
| ·纤维素酶的结构 | 第19-20页 |
| ·纤维素酶的作用机理 | 第20-21页 |
| ·纤素酶的活性测定方法 | 第21页 |
| ·纤维素酶的分离纯化 | 第21-22页 |
| ·纤维素酶的基因克隆 | 第22-23页 |
| ·纤维素酶功能性氨基酸的研究及意义 | 第23-25页 |
| ·海洋纤维素酶的研究 | 第25-26页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第26-29页 |
| ·纤维素酶在海藻遗传工程中的应用 | 第26页 |
| ·纤维素酶在动物饲料的应用 | 第26-27页 |
| ·纤维素酶在造纸业中的应用 | 第27页 |
| ·纤维素酶在纺织业的应用 | 第27-28页 |
| ·纤维素酶在食品工业中的应用 | 第28页 |
| ·纤维素酶在发酵、酿造工业中的应用 | 第28-29页 |
| ·本论文的前期工作和研究展望 | 第29-31页 |
| 1 内切葡聚糖酶 CelA 的分离纯化 | 第31-40页 |
| ·材料与仪器 | 第31-32页 |
| ·仪器 | 第31-32页 |
| ·菌株及培养基 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-36页 |
| ·酶活检测方法 | 第32-33页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第33-34页 |
| ·菌株的活化和筛选 | 第34页 |
| ·粗酶液的制备 | 第34页 |
| ·酶的分离纯化 | 第34-36页 |
| ·硫酸铵沉淀粗分离 | 第34-35页 |
| ·G-25柱脱盐 | 第35页 |
| ·离子交换层析 | 第35页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第35页 |
| ·G-25柱脱盐 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第35-36页 |
| ·实验结果 | 第36-39页 |
| ·离子交换层析 | 第36-37页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第37页 |
| ·分离纯化结果 | 第37-38页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 2 内切葡聚糖酶的性质研究 | 第40-53页 |
| ·材料与仪器 | 第40页 |
| ·仪器 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-42页 |
| ·内切葡聚糖酶的生化性质分析 | 第40-42页 |
| ·反应最适温度 | 第40-41页 |
| ·反应最适pH | 第41页 |
| ·温度对酶活稳定性的影响 | 第41页 |
| ·pH对酶活稳定性的影响 | 第41页 |
| ·EDTA、金属离子对酶活性的影响 | 第41页 |
| ·CelA对蛋白酶的抗性研究 | 第41页 |
| ·酶的底物特异性研究 | 第41-42页 |
| ·内切葡聚糖酶的降解产物研究 | 第42页 |
| ·CelA降解产物的质谱分析 | 第42页 |
| ·纤维寡糖的制备和CelA的降解产物分析 | 第42页 |
| ·实验结果 | 第42-51页 |
| ·内切葡聚糖酶的生化性质研究 | 第42-47页 |
| ·酶的最适反应温度 | 第42-43页 |
| ·酶的最适反应pH | 第43-44页 |
| ·酶的温度稳定性 | 第44-45页 |
| ·pH对酶稳定性的影响 | 第45页 |
| ·EDTA、金属离子对酶活性的影响 | 第45-46页 |
| ·蛋白酶处理对酶活性研究 | 第46-47页 |
| ·酶的底物特异性研究 | 第47页 |
| ·内切葡聚糖酶的降解产物研究 | 第47-51页 |
| ·降解产物的质谱分析 | 第47-49页 |
| ·纤维寡糖的制备和CelA的降解产物分析 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 3 内切葡聚糖酶的基因克隆、重组蛋白的表达纯化 | 第53-88页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·实验仪器 | 第53-54页 |
| ·菌株与培养基 | 第54页 |
| ·试剂 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-65页 |
| ·内切葡聚糖酶基因 celA 的克隆 | 第54-61页 |
| ·N-端和中间氨基酸序列的测定 | 第54-55页 |
| ·Cellulophaga sp.QY201 基因组 DNA 的提取 | 第55-56页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第56-57页 |
| ·简并 PCR 扩增目的片段 | 第57-58页 |
| ·第一次反向 PCR | 第58-60页 |
| ·第二次反向 PCR | 第60-61页 |
| ·PCR 产物的序列分析 | 第61页 |
| ·内切葡聚糖酶基因celA表达体系的构建 | 第61-63页 |
| ·引物的设计和合成 | 第61页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第61-62页 |
| ·PCR 产物的纯化与酶切 | 第62页 |
| ·pET-24a(+)载体质粒的制备 | 第62页 |
| ·重组表达载体的建立 | 第62-63页 |
| ·重组质粒的测序 | 第63页 |
| ·内切葡聚糖酶基因 CelA 的重组表达和纯化 | 第63-64页 |
| ·重组内切葡聚糖酶rCelA 的制备 | 第63页 |
| ·Ni-亲和柱层析 | 第63-64页 |
| ·重组内切葡聚糖酶rCelA 的酶学性质研究 | 第64-65页 |
| ·rCelA的最适反应温度 | 第64页 |
| ·rCelA最适反应pH | 第64页 |
| ·温度对rCelA酶活稳定性的影响 | 第64页 |
| ·pH对rCelA酶活稳定性的影响 | 第64-65页 |
| ·rCelA的底物特异性研究 | 第65页 |
| ·实验结果 | 第65-86页 |
| ·内切葡聚糖酶基因celA 的克隆 | 第65-82页 |
| ·N-端和中间氨基酸序列的测定 | 第65-70页 |
| ·简并 PCR 扩增目的片段 | 第70-72页 |
| ·反向 PCR | 第72-75页 |
| ·celA 基因及其编码蛋白 CelA 的序列分析 | 第75-77页 |
| ·序列相似性搜索 BLASTp | 第77-80页 |
| ·保守区域（Conserved Domain）搜索- RPS-BLAST | 第80页 |
| ·内切葡聚糖酶 CelA 氨基酸组成 | 第80-82页 |
| ·内切葡聚糖酶基因celA表达体系的构建 | 第82-83页 |
| ·CelA的表达及纯化 | 第83-85页 |
| ·重组酶的酶学性质研究 | 第85-86页 |
| ·总结与讨论 | 第86-88页 |
| 总结与展望 | 第88-90页 |
| 参考文章 | 第90-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 个人简历 | 第95-96页 |
| 发表的学术论文 | 第96页 |
