| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-18页 |
| 第一部分 文献综述 | 第18-61页 |
| 第一章 昆虫抗冻蛋白结构与功能关系的研究 | 第18-28页 |
| 1 超强的抗冻活性 | 第19-20页 |
| 2 规则的一级结构 | 第20-21页 |
| 3 相似的冰晶结合表面 | 第21-22页 |
| 4 昆虫AFPs 的起源与演化 | 第22-23页 |
| 参考文献 | 第23-28页 |
| 第二章 昆虫抗冻蛋白作用机理的研究进展 | 第28-39页 |
| 1 吸附-抑制理论 | 第28页 |
| 2 影响AFP 热滞活性的因素 | 第28-32页 |
| ·AFP 与不同冰晶表面结合的影响 | 第28-29页 |
| ·AFP 分子大小的影响 | 第29-30页 |
| ·AFP 溶解度的影响 | 第30-31页 |
| ·增效剂对AFP 热滞活性的影响 | 第31-32页 |
| 3 AFPs 与细胞膜的作用机制 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-39页 |
| 第三章 抗冻蛋白在低温保护生物学领域的研究进展 | 第39-61页 |
| 1 AFP 对动物胚胎低温保护作用的研究 | 第39-43页 |
| ·动物胚胎低温保存技术及影响因素 | 第39-40页 |
| ·AFP 在动物胚胎低温保存中的应用 | 第40-42页 |
| ·AFP 应用于动物胚胎低温保存的展望 | 第42-43页 |
| 2 AFP 对真核细胞和脏器的低温保护作用及保护机理研究 | 第43-47页 |
| ·在0-4℃低温下的保护作用 | 第43-44页 |
| ·在零下低温的保护作用 | 第44-45页 |
| ·AFP 在低温保存中的作用机理 | 第45-47页 |
| 3 AFP 在食品冷冻保鲜领域的应用前景 | 第47-48页 |
| 4 转基因抗冻生物的研究进展 | 第48-50页 |
| ·AFP 转基因动物的研究 | 第48-49页 |
| ·AFP 转基因植物的研究 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-61页 |
| 第二部分 新疆荒漠昆虫光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP 的表达与性质研究 | 第61-162页 |
| 第一章 光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP752 的原核表达及性质研究 | 第61-86页 |
| 1 材料和方法 | 第63-69页 |
| ·材料与试剂 | 第63-64页 |
| ·常规溶液 | 第64页 |
| ·引物设计与合成 | 第64页 |
| ·抗冻蛋白基因Apafp752 的克隆 | 第64-66页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第66页 |
| ·融合蛋白TrxA-ApAFP752 的表达、SDS-PAGE 检测及纯化 | 第66-67页 |
| ·蛋白印迹分析 | 第67页 |
| ·融合蛋白TrxA-ApAFP752 的热滞活性测定 | 第67-68页 |
| ·体外低温保护活性分析 | 第68-69页 |
| ·pH 稳定性和热稳定性 | 第69页 |
| ·三维结构模型建立 | 第69页 |
| 2 结果 | 第69-79页 |
| ·ApAFP752 的序列分析 | 第69-70页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第70-71页 |
| ·TrxA- ApAFP752 的表达及纯化 | 第71-73页 |
| ·TrxA-ApAFP752 对冰晶形态的修饰作用 | 第73-74页 |
| ·体外低温保护活性分析 | 第74-76页 |
| ·pH 稳定性和热稳定性 | 第76-77页 |
| ·ApAFP752 的三维结构预测 | 第77-79页 |
| 3 讨论 | 第79-82页 |
| 参考文献 | 第82-86页 |
| 第二章 光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP752 的热力学性质研究 | 第86-99页 |
| 1 材料与方法 | 第88-90页 |
| ·重组抗冻蛋白ApAFP752 的制备 | 第88-89页 |
| ·差示扫描量热（DSC）分析 | 第89页 |
| ·热重分析 | 第89页 |
| ·圆二色光谱分析 | 第89-90页 |
| 2 结果 | 第90-95页 |
| ·差示扫描量热（DSC）分析 | 第90-93页 |
| ·热重分析 | 第93-94页 |
| ·CD 光谱分析 | 第94-95页 |
| 3 讨论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-99页 |
| 第三章 小分子物质对重组光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP752 的增效作用 | 第99-112页 |
| 1 材料与方法 | 第101-102页 |
| ·材料与试剂 | 第101页 |
| ·重组ApAFP752 的制备 | 第101页 |
| ·热滞活性测定 | 第101-102页 |
| 2 结果 | 第102-106页 |
| ·盐离子对ApAFP752 的增效作用 | 第102-103页 |
| ·羧基化合物对ApAFP752 的增效作用 | 第103-105页 |
| ·多羟基化合物对ApAFP752 的增效作用 | 第105-106页 |
| 3 讨论 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-112页 |
| 第四章 两种重组光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914 的比较研究 | 第112-143页 |
| 1 材料和方法 | 第115-122页 |
| ·材料与试剂 | 第115页 |
| ·His-ApAFP914 的引物设计与合成 | 第115页 |
| ·EGFP-ApAFP914 的引物设计与合成 | 第115-116页 |
| ·抗冻蛋白基因Apafp914 和绿色荧光蛋白基因egfp 的PCR 扩增 | 第116页 |
| ·原核表达载体pET28a-Apafp914 的构建 | 第116-117页 |
| ·原核表达载体pET28a-egfp-Apafp914 的构建 | 第117页 |
| ·感受态细胞的制备及转化 | 第117-118页 |
| ·重组蛋白His-ApAFP914 的表达及SDS-PAGE 检测 | 第118页 |
| ·重组蛋白His-ApAFP914 包涵体的复性及纯化 | 第118页 |
| ·重组蛋白EGFP-ApAFP914 的表达及SDS-PAGE 检测与纯化 | 第118-119页 |
| ·重组蛋白ApAFP914 的蛋白印迹分析 | 第119页 |
| ·两种重组ApAFP914 的热滞活性测定及冰晶形态观察 | 第119-120页 |
| ·两种重组ApAFP914 的体外低温保护活性分析 | 第120页 |
| ·pH 稳定性和热稳定性检测 | 第120-121页 |
| ·His-ApAFP914 的圆二色光谱分析 | 第121页 |
| ·ApAFP914 三维结构模型建立 | 第121-122页 |
| 2 结果 | 第122-134页 |
| ·ApAFP914 的序列分析 | 第122-123页 |
| ·原核表达载体pET28a-Apafp914 的构建 | 第123-124页 |
| ·原核表达载体pET28a-egfp-Apafp914 的构建 | 第124页 |
| ·His-ApAFP914 的表达及纯化 | 第124-126页 |
| ·EGFP-ApAFP914 的表达与纯化 | 第126-127页 |
| ·重组ApAFP914 的热滞活性测定及冰晶形态观察 | 第127-130页 |
| ·重组ApAFP914 体外低温保护活性分析 | 第130-132页 |
| ·两种重组ApAFP914 的pH 稳定性和热稳定性 | 第132-133页 |
| ·His-ApAFP914 的CD 光谱分析 | 第133-134页 |
| 3 讨论 | 第134-138页 |
| 参考文献 | 第138-143页 |
| 第五章 光滑鳖甲抗冻蛋白生物信息学研究及结构与功能的比较 | 第143-162页 |
| 1 材料与方法 | 第145-146页 |
| ·材料 | 第145页 |
| ·序列比对、疏水性及等电点分析方法 | 第145-146页 |
| ·圆二色光谱分析 | 第146页 |
| ·三维结构模型建立 | 第146页 |
| 2 结果与分析 | 第146-154页 |
| ·氨基酸序列同源性检索 | 第146-148页 |
| ·序列分析 | 第148-149页 |
| ·同源进化树的构建 | 第149-150页 |
| ·疏水性分析 | 第150-151页 |
| ·二级结构测定 | 第151-152页 |
| ·三维结构预测 | 第152-154页 |
| 3 讨论 | 第154-157页 |
| 参考文献 | 第157-162页 |
| 第三部分 重组光滑鳖甲抗冻蛋白的低温保护应用研究 | 第162-197页 |
| 第一章 重组光滑鳖甲抗冻蛋白内源性表达对菌体低温存活的影响 | 第162-173页 |
| 1 材料与方法 | 第164-165页 |
| ·材料 | 第164页 |
| ·感受态细胞的制备及转化 | 第164页 |
| ·重组蛋白EGFP-ApAFP914 在菌体中的表达及检测 | 第164-165页 |
| ·表达菌低温存活率的测定 | 第165页 |
| ·低温处理后表达菌的生长曲线 | 第165页 |
| 2 结果 | 第165-168页 |
| ·重组蛋白在菌体中的表达及检测 | 第165-166页 |
| ·表达菌低温存活率的测定 | 第166-167页 |
| ·低温处理后表达菌的生长曲线 | 第167-168页 |
| 3 讨论 | 第168-170页 |
| 参考文献 | 第170-173页 |
| 第二章 重组光滑鳖甲抗冻蛋白改善哺乳动物红细胞的低温保存 | 第173-185页 |
| 1 材料与方法 | 第175-177页 |
| ·材料 | 第175页 |
| ·重组光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914 的制备 | 第175-176页 |
| ·红细胞的制备 | 第176页 |
| ·重组ApAFP914 对红细胞的毒性检测 | 第176页 |
| ·抗冻蛋白对低温保存红细胞的保护分析 | 第176页 |
| ·红细胞渗透性分析 | 第176-177页 |
| ·统计学分析 | 第177页 |
| 2 结果 | 第177-180页 |
| ·rApAFP914 对红细胞的毒性分析 | 第177页 |
| ·rApAFP914 对零下低温-3℃处理的红细胞的保护作用 | 第177-179页 |
| ·rApAFP914 对4℃处理的红细胞的保护作用 | 第179-180页 |
| 3 讨论 | 第180-182页 |
| 参考文献 | 第182-185页 |
| 第三章 重组光滑鳖甲抗冻蛋白对反复冻融的乳酸脱氢酶活性影响 | 第185-197页 |
| 1 材料与方法 | 第186-189页 |
| ·材料 | 第186-187页 |
| ·重组光滑鳖甲抗冻蛋白的制备 | 第187-188页 |
| ·重组光滑鳖甲抗冻蛋白的热滞活性测定 | 第188页 |
| ·测定使乳酸脱氢酶LDH 失活的冻融次数 | 第188页 |
| ·重组光滑鳖甲抗冻蛋白对LDH 的低温保护分析 | 第188-189页 |
| 2 结果 | 第189-192页 |
| ·重组光滑鳖甲抗冻蛋白的热滞活性测定 | 第189页 |
| ·LDH 失活冻融次数的确定 | 第189-190页 |
| ·重组ApAFPs 对LDH 活性影响 | 第190-192页 |
| 3 讨论 | 第192-194页 |
| 参考文献 | 第194-197页 |
| 第四部分 结论与展望 | 第197-198页 |
| 1、新疆荒漠甲虫光滑鳖甲抗冻蛋白的表达及性质研究 | 第197页 |
| 2、光滑鳖甲抗冻蛋白的低温保护应用研究 | 第197-198页 |
| 附录1 英文缩略语 | 第198-199页 |
| 附录2 主要实验仪器 | 第199-200页 |
| 致谢 | 第200-201页 |
| 个人简介 | 第201页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文 | 第201页 |
