| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-27页 |
| 一、昆虫对低温的适应 | 第15-19页 |
| 1、影响昆虫耐寒性的因素 | 第15-17页 |
| ·季节变化 | 第15-16页 |
| ·地理环境 | 第16页 |
| ·水分关系 | 第16-17页 |
| ·个体发育阶段 | 第17页 |
| ·低温胁迫 | 第17页 |
| 2、昆虫耐寒性的生理生化机制 | 第17-19页 |
| ·抗冻保护剂的产生及其作用 | 第17-18页 |
| ·抗冻蛋白的产生及其作用 | 第18页 |
| ·冰核剂的产生及其作用 | 第18-19页 |
| 二、生物体与含水量的关系 | 第19-21页 |
| 1、季节性变化对机体含水量的影响 | 第19页 |
| 2、低温环境对机体含水量的影响 | 第19-20页 |
| 3、干旱环境对机体含水量的影响 | 第20-21页 |
| 参考文献 | 第21-27页 |
| 第二部分 实验内容 | 第27-80页 |
| 1 材料及试剂 | 第28-29页 |
| ·试虫 | 第28页 |
| ·试剂 | 第28-29页 |
| ·主要实验仪器 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-41页 |
| ·耐寒力的测定 | 第29-30页 |
| ·过冷却点的测定 | 第29页 |
| ·含水量的测定 | 第29页 |
| ·体液的收集 | 第29-30页 |
| ·渗透浓度的测定 | 第30页 |
| ·准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因表达规律的研究 | 第30-38页 |
| ·实时荧光定量PCR 引物的设计 | 第30-32页 |
| ·Real Time PCR 引物设计的要求 | 第30页 |
| ·准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因核心片段PCR引物的设计 | 第30-31页 |
| ·昆虫内参基因β-actin 引物的设计 | 第31-32页 |
| ·准噶尔小胸鳖甲总RNA 的提取 | 第32-33页 |
| ·反转录反应 | 第33-34页 |
| ·梯度PCR | 第34-35页 |
| ·构建pMD19-T-Mpafp 等测序载体 | 第35页 |
| ·不同曲线的绘制与分析 | 第35-37页 |
| ·扩增曲线的绘制与分析 | 第35-36页 |
| ·标准曲线的绘制与分析 | 第36页 |
| ·融解曲线的绘制与分析 | 第36-37页 |
| ·不同检测基因扩增效率的校正 | 第37页 |
| ·Real Time 荧光定量PCR | 第37-38页 |
| ·数据分析 | 第38页 |
| ·不同环境因子胁迫准噶尔小胸鳖甲 | 第38-41页 |
| ·不同月份准噶尔小胸鳖甲成虫的采集和室内饲养 | 第38-39页 |
| ·长期低温胁迫准噶尔小胸鳖甲成虫 | 第39页 |
| ·短期低温胁迫准噶尔小胸鳖甲成虫 | 第39页 |
| ·干旱胁迫准噶尔小胸鳖甲 | 第39页 |
| ·准噶尔小胸鳖甲幼虫的饲养 | 第39-41页 |
| 3 结果及分析 | 第41-69页 |
| ·Real Time 荧光定量PCR 反应条件的优化 | 第41-50页 |
| ·内参基因β-actin 的选定及其作用 | 第41-42页 |
| ·引物浓度和退火温度的优化 | 第42-44页 |
| ·制作标准曲线评定反应条件的优良性 | 第44-45页 |
| ·制作融解曲线评定反应条件的优良性 | 第45-46页 |
| ·准噶尔小胸鳖甲总RNA 的提取结果 | 第46-49页 |
| ·测序结果 | 第49-50页 |
| ·准噶尔小胸鳖甲成虫抗冻蛋白基因的季节性表达规律 | 第50-57页 |
| ·采样点的环境特点和昆虫采集情况 | 第50-51页 |
| ·野外采集的准噶尔小胸鳖甲成虫的过冷却点 | 第51-52页 |
| ·野外采集的准噶尔小胸鳖甲成虫的含水量 | 第52-53页 |
| ·含水量与过冷却点的关系 | 第53页 |
| ·Mpafp 转录水平的季节性变化 | 第53-54页 |
| ·渗透浓度的季节性变化 | 第54-55页 |
| ·Mpafp 转录水平的积累和微环境的关系 | 第55-57页 |
| ·Mpafp 转录水平的积累与含水量的关系 | 第57页 |
| ·低温胁迫对准噶尔小胸鳖甲成虫抗冻蛋白基因表达规律的影响 | 第57-62页 |
| ·长期低温胁迫时准噶尔小胸鳖甲成虫的含水量 | 第57-58页 |
| ·长期低温胁迫时准噶尔小胸鳖甲成虫的过冷却点 | 第58-59页 |
| ·长期低温胁迫对Mpafp 的转录水平和体液渗透浓度的影响 | 第59-60页 |
| ·长期低温胁迫Mpafp转录水平的积累与含水量的关系 | 第60-61页 |
| ·短期低温胁迫对Mpafp 的转录水平和体液渗透浓度的影响 | 第61-62页 |
| ·干旱胁迫对准噶尔小胸鳖甲成虫抗冻蛋白基因表达规律的影响 | 第62-66页 |
| ·干旱胁迫时准噶尔小胸鳖甲成虫的含水量 | 第62-63页 |
| ·干旱胁迫时准噶尔小胸鳖甲成虫的过冷却点 | 第63-64页 |
| ·干旱胁迫对Mpafp的转录水平和体液渗透浓度的影响 | 第64-65页 |
| ·干旱胁迫Mpafp 转录水平的积累与含水量的关系 | 第65-66页 |
| ·准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因的发育阶段性表达规律 | 第66-69页 |
| ·不同发育阶段准噶尔小胸鳖甲的含水量 | 第66页 |
| ·不同发育阶段准噶尔小胸鳖甲的过冷却点 | 第66-67页 |
| ·不同发育阶段对Mpafp 的转录水平和体液渗透浓度的影响 | 第67-68页 |
| ·不同发育阶段Mpafp转录水平的积累与含水量的关系 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-75页 |
| ·季节性温度变化对准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因转录水平的影响 | 第69-71页 |
| ·低温胁迫对准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因转录水平的影响 | 第71-72页 |
| ·干旱胁迫对准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因转录水平的影响 | 第72-73页 |
| ·不同发育阶段对准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因转录水平的影响 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 第三部分 结论与展望 | 第80-82页 |
| 第四部分 附录 | 第82-87页 |
| 附录1 常用试剂配制方法 | 第82-85页 |
| 附录2 常用仪器设备 | 第85-86页 |
| 附录3 个人简历 | 第86-87页 |
| 附录4 致谢 | 第87页 |
