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猪圆环病毒2型ELISA抗体检测方法的建立及PCV2单克隆抗体的制备

摘要第1-6页
Abstract第6-8页
目录第8-12页
引言第12-13页
第一部分 文献综述第13-27页
 1 病原学第13-14页
   ·猪圆环病毒的发现与命名第13页
   ·PCV的分类地位及分型第13-14页
   ·PCV的形态及理化特征第14页
   ·PCV的增殖与培养特性第14页
 2 PCV的分子生物学特性第14-18页
   ·PCV的基因组特征第14-15页
   ·PCV编码蛋白及功能第15-16页
   ·PCV的复制及转录第16-18页
 3 流行病学第18-19页
 4 致病机理第19-20页
 5 PCV2检测方法研究进展第20-24页
   ·电镜法第21页
   ·免疫组织化学检测技术第21页
   ·免疫荧光技术第21-22页
   ·酶联免疫吸附试验诊断方法第22页
   ·免疫过氧化物酶单层细胞试验第22页
   ·免疫胶体金技术第22页
   ·聚合酶链反应第22-23页
   ·原位杂交方法第23页
   ·基因芯片检测技术第23-24页
 6 PCV2感染的防治第24页
 7 猪圆环病毒单克隆抗体研究进展第24-25页
   ·单克隆抗体技术第24-25页
   ·PCV2单克隆抗体的研究第25页
 8 本研究的意义第25-27页
第二部分 猪圆环病毒2型ORF2基因片段的原核表达第27-40页
 1 材料与试剂第27-29页
   ·病毒、载体及菌株第27页
   ·主要试剂和酶第27-28页
   ·主要试剂配制第28-29页
 2 方法第29-34页
   ·引物设计与合成第29页
   ·PCR模板的制备第29-30页
   ·PCR扩增第30页
   ·DNA片段回收第30页
   ·重组质粒pMD18-T-ORF2的构建第30-32页
   ·重组原核表达质粒的构建第32-33页
   ·重组融合蛋白PET-28a-ORF2的诱导表达及检测第33-34页
 3 结果与分析第34-38页
   ·目的基因片段的扩增第34-35页
   ·pMD18-T-ORF2的酶切鉴定第35-36页
   ·重组质粒pET-28a-ORF2的PCR和酶切鉴定第36-37页
   ·重组蛋白的SDS-PAGE分析第37页
   ·重组蛋白的Western-Blot分析第37-38页
 4 讨论第38-40页
第三部分 PCV2 Cap蛋白间接ELISA检测方法的建立第40-55页
 1 材料与试剂第40-43页
   ·主要实验仪器和设备第40页
   ·主要试剂配制第40-43页
 2 方法第43-46页
   ·包涵体的制备和纯化第43-44页
   ·包涵体的复性第44页
   ·间接ELISA检测方法的建立第44-46页
 3 结果与分析第46-53页
   ·重组蛋白抗原最佳包被浓度与血清稀释度的确定第46-47页
   ·重组抗原包被条件的确定第47-48页
   ·封闭液的选择第48页
   ·一抗血清最佳反应时间的确定第48-49页
   ·酶标二抗最佳工作浓度的确定第49页
   ·酶标二抗最佳工作时间的确定第49-50页
   ·显色时间的确定第50页
   ·间接ELISA阴阳性临界值的确定第50-51页
   ·特异性试验第51-52页
   ·重复性试验第52页
   ·临床血清样品检测第52-53页
 4 讨论第53-55页
第四部分 PCV2单克隆抗体的制备第55-65页
 1 材料与试剂第55-56页
   ·病毒、实验动物与细胞第55页
   ·主要试剂配制第55-56页
 2 方法第56-61页
   ·免疫原的制备第56-58页
   ·免疫第58页
   ·抗原最佳包被浓度和最佳血清稀释度的确定第58页
   ·杂交瘤细胞株的建立第58-60页
   ·单克隆抗体的生产第60-61页
   ·杂交瘤细胞株的鉴定第61页
 3 结果第61-63页
   ·PCV2的PCR检测第61-62页
   ·PCV2抗原的含量第62页
   ·免疫结果第62页
   ·ELISA抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定第62页
   ·细胞融合筛选结果第62页
   ·杂交瘤细胞培养上清效价的测定第62-63页
 4 讨论第63-65页
   ·病毒培养第63页
   ·抗原制备第63页
   ·动物免疫第63-64页
   ·细胞融合第64页
   ·关于细胞培养中的问题第64-65页
第五部分 全文总结第65-66页
参考文献第66-71页
硕士期间发表的学术论文与研究成果第71-72页
致谢第72页

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