| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-27页 |
| 1 病原学 | 第13-14页 |
| ·猪圆环病毒的发现与命名 | 第13页 |
| ·PCV的分类地位及分型 | 第13-14页 |
| ·PCV的形态及理化特征 | 第14页 |
| ·PCV的增殖与培养特性 | 第14页 |
| 2 PCV的分子生物学特性 | 第14-18页 |
| ·PCV的基因组特征 | 第14-15页 |
| ·PCV编码蛋白及功能 | 第15-16页 |
| ·PCV的复制及转录 | 第16-18页 |
| 3 流行病学 | 第18-19页 |
| 4 致病机理 | 第19-20页 |
| 5 PCV2检测方法研究进展 | 第20-24页 |
| ·电镜法 | 第21页 |
| ·免疫组织化学检测技术 | 第21页 |
| ·免疫荧光技术 | 第21-22页 |
| ·酶联免疫吸附试验诊断方法 | 第22页 |
| ·免疫过氧化物酶单层细胞试验 | 第22页 |
| ·免疫胶体金技术 | 第22页 |
| ·聚合酶链反应 | 第22-23页 |
| ·原位杂交方法 | 第23页 |
| ·基因芯片检测技术 | 第23-24页 |
| 6 PCV2感染的防治 | 第24页 |
| 7 猪圆环病毒单克隆抗体研究进展 | 第24-25页 |
| ·单克隆抗体技术 | 第24-25页 |
| ·PCV2单克隆抗体的研究 | 第25页 |
| 8 本研究的意义 | 第25-27页 |
| 第二部分 猪圆环病毒2型ORF2基因片段的原核表达 | 第27-40页 |
| 1 材料与试剂 | 第27-29页 |
| ·病毒、载体及菌株 | 第27页 |
| ·主要试剂和酶 | 第27-28页 |
| ·主要试剂配制 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-34页 |
| ·引物设计与合成 | 第29页 |
| ·PCR模板的制备 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增 | 第30页 |
| ·DNA片段回收 | 第30页 |
| ·重组质粒pMD18-T-ORF2的构建 | 第30-32页 |
| ·重组原核表达质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·重组融合蛋白PET-28a-ORF2的诱导表达及检测 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-38页 |
| ·目的基因片段的扩增 | 第34-35页 |
| ·pMD18-T-ORF2的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pET-28a-ORF2的PCR和酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第37页 |
| ·重组蛋白的Western-Blot分析 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| 第三部分 PCV2 Cap蛋白间接ELISA检测方法的建立 | 第40-55页 |
| 1 材料与试剂 | 第40-43页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第40页 |
| ·主要试剂配制 | 第40-43页 |
| 2 方法 | 第43-46页 |
| ·包涵体的制备和纯化 | 第43-44页 |
| ·包涵体的复性 | 第44页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第44-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-53页 |
| ·重组蛋白抗原最佳包被浓度与血清稀释度的确定 | 第46-47页 |
| ·重组抗原包被条件的确定 | 第47-48页 |
| ·封闭液的选择 | 第48页 |
| ·一抗血清最佳反应时间的确定 | 第48-49页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第49页 |
| ·酶标二抗最佳工作时间的确定 | 第49-50页 |
| ·显色时间的确定 | 第50页 |
| ·间接ELISA阴阳性临界值的确定 | 第50-51页 |
| ·特异性试验 | 第51-52页 |
| ·重复性试验 | 第52页 |
| ·临床血清样品检测 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 第四部分 PCV2单克隆抗体的制备 | 第55-65页 |
| 1 材料与试剂 | 第55-56页 |
| ·病毒、实验动物与细胞 | 第55页 |
| ·主要试剂配制 | 第55-56页 |
| 2 方法 | 第56-61页 |
| ·免疫原的制备 | 第56-58页 |
| ·免疫 | 第58页 |
| ·抗原最佳包被浓度和最佳血清稀释度的确定 | 第58页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第58-60页 |
| ·单克隆抗体的生产 | 第60-61页 |
| ·杂交瘤细胞株的鉴定 | 第61页 |
| 3 结果 | 第61-63页 |
| ·PCV2的PCR检测 | 第61-62页 |
| ·PCV2抗原的含量 | 第62页 |
| ·免疫结果 | 第62页 |
| ·ELISA抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第62页 |
| ·细胞融合筛选结果 | 第62页 |
| ·杂交瘤细胞培养上清效价的测定 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-65页 |
| ·病毒培养 | 第63页 |
| ·抗原制备 | 第63页 |
| ·动物免疫 | 第63-64页 |
| ·细胞融合 | 第64页 |
| ·关于细胞培养中的问题 | 第64-65页 |
| 第五部分 全文总结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 硕士期间发表的学术论文与研究成果 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
