| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-7页 |
| 英文缩写索引 | 第11-12页 |
| 1 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 问题的提出和研究意义 | 第12-13页 |
| 1.1.1 问题的提出 | 第12-13页 |
| 1.1.2 研究意义 | 第13页 |
| 1.2 国内外研究进展简介 | 第13-18页 |
| 1.2.1 微纳米拓扑结构基底的制备技术 | 第13-15页 |
| 1.2.2 拓扑结构基底对细胞生物学行为影响的研究概况 | 第15-16页 |
| 1.2.3 肺部纤维化疾病与上皮间质化过程的研究概况 | 第16-17页 |
| 1.2.4 拓扑结构基底影响EMT过程相关机理的研究概况 | 第17-18页 |
| 1.3 研究目的和研究内容 | 第18-19页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第18页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第18-19页 |
| 1.4 技术路线 | 第19-20页 |
| 1.5 创新点 | 第20-22页 |
| 2 PDMS微柱阵列型拓扑结构基底的制备及其与A549细胞的复合 | 第22-30页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验仪器、试剂和材料 | 第22-24页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.2.2 实验试剂和材料 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法和步骤 | 第24-25页 |
| 2.3.1 PDMS微柱阵列型拓扑结构基底的设计和制备 | 第24页 |
| 2.3.2 AFM检测不同硬度PDMS平面和微柱阵列型结构基底的杨氏模量 | 第24-25页 |
| 2.3.3 A549细胞培养 | 第25页 |
| 2.3.4 A549细胞与PDMS平面基底和微柱阵列型拓扑结构基底的复合 | 第25页 |
| 2.3.5 数据处理与分析 | 第25页 |
| 2.4 实验结果 | 第25-28页 |
| 2.4.1 微柱阵列型拓扑结构制作流程和相差显微镜记录微柱分布 | 第25-27页 |
| 2.4.2 不同硬度PDMS平面基底和微柱阵列型拓扑结构基底的杨氏模量 | 第27页 |
| 2.4.3 A549细胞与PDMS平面基底和微柱阵列型拓扑结构基底的复合 | 第27-28页 |
| 2.5 讨论和分析 | 第28-29页 |
| 2.6 本章小结 | 第29-30页 |
| 3 微柱阵列型拓扑结构基底对A549细胞生物学行为的影响 | 第30-42页 |
| 3.1 引言 | 第30页 |
| 3.2 实验仪器、试剂和材料 | 第30-33页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第30-31页 |
| 3.2.2 试剂和材料 | 第31-33页 |
| 3.3 实验方法和步骤 | 第33-37页 |
| 3.3.1 A549细胞培养 | 第33页 |
| 3.3.2 扫描电镜观察细胞形态及细胞形态的量化 | 第33页 |
| 3.3.3 A549细胞骨架染色 | 第33页 |
| 3.3.4 A549细胞Vinculin免疫荧光染色 | 第33-34页 |
| 3.3.5 Westernblot检测Vinculin蛋白的表达 | 第34-37页 |
| 3.3.6 数据处理与分析 | 第37页 |
| 3.4 实验结果 | 第37-40页 |
| 3.4.1 SEM观察PDMS平面基底和微柱阵列型拓扑结构基底对A549细胞形态的影响 | 第37-38页 |
| 3.4.2 不同微柱阵列型结构基底对A549细胞铺展面积、细胞极化和细胞圆度的影响 | 第38页 |
| 3.4.3 不同微柱阵列型拓扑结构基底对A549细胞Vinculin蛋白表达的影响 | 第38-39页 |
| 3.4.4 不同微柱阵列型拓扑结构基底对A549细胞骨架的影响 | 第39-40页 |
| 3.5 讨论和分析 | 第40-41页 |
| 3.6 本章小结 | 第41-42页 |
| 4 微柱阵列型拓扑结构基底对TGF-β1诱导的A549细胞EMT过程的影响及其机制初探 | 第42-50页 |
| 4.1 引言 | 第42-43页 |
| 4.2 实验仪器、试剂和材料 | 第43-45页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第43页 |
| 4.2.2 试剂和材料 | 第43-45页 |
| 4.3 实验方法和步骤 | 第45-46页 |
| 4.3.1 不同微柱阵列型拓扑结构基底的制备 | 第45页 |
| 4.3.2 A549人肺泡上皮细胞的培养 | 第45页 |
| 4.3.3 A549细胞与PDMS微柱阵列型结构基底的复合培养 | 第45页 |
| 4.3.4 TGF-β1诱导的A549细胞EMT模型的构建 | 第45页 |
| 4.3.5 Westernblot | 第45页 |
| 4.3.6 数据处理与分析 | 第45-46页 |
| 4.4 实验结果 | 第46-48页 |
| 4.4.1 成功建立TGF-β1诱导的EMT模型 | 第46页 |
| 4.4.2 微柱阵列型拓扑结构基底对EMT过程的影响 | 第46-47页 |
| 4.4.3 微柱阵列型拓扑结构基底促进EMT过程与Smad信号通路的关系 | 第47-48页 |
| 4.5 讨论和分析 | 第48-49页 |
| 4.6 本章小结 | 第49-50页 |
| 5 FAK在微柱阵列型拓扑结构基底促进的EMT过程中的调控作用 | 第50-62页 |
| 5.1 引言 | 第50页 |
| 5.2 实验仪器、试剂和材料 | 第50-52页 |
| 5.2.1 实验仪器 | 第50-51页 |
| 5.2.2 试剂和材料 | 第51-52页 |
| 5.3 实验方法和步骤 | 第52-55页 |
| 5.3.1 Westernblot检测不同微柱阵列型拓扑结构基底下FAK、p-FAK蛋白的表达 | 第52页 |
| 5.3.2 构建FAKshRNA重组载体 | 第52-54页 |
| 5.3.3 质粒瞬时转染 | 第54页 |
| 5.3.4 构建稳定表达FAK-shRNA的A549细胞株 | 第54-55页 |
| 5.3.5 数据处理与分析 | 第55页 |
| 5.4 实验结果 | 第55-60页 |
| 5.4.1 不同微柱阵列型结构基底对A549细胞FAK蛋白表达的影响 | 第55-56页 |
| 5.4.2 重组质粒 pLKO.1-FAK -sh RNA | 第56-58页 |
| 5.4.3 构建shRNA稳定沉默FAK基因的A549细胞株 | 第58页 |
| 5.4.4 沉默FAK对A549细胞形态的影响 | 第58-59页 |
| 5.4.5 shRNA稳定沉默FAK基因对微柱阵列型拓扑结构基底促进的EMT过程的影响 | 第59-60页 |
| 5.5 讨论和分析 | 第60页 |
| 5.6 本章小结 | 第60-62页 |
| 6 结论与展望 | 第62-64页 |
| 6.1 主要结论 | 第62-63页 |
| 6.2 后续工作展望 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-76页 |
| 附录 | 第76页 |
| A.作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第76页 |
| B.作者在攻读硕士学位期间参加的科研项目情况 | 第76页 |
