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微柱阵列型结构基底对人肺泡上皮细胞生物学行为的影响及相关机制初探

中文摘要第3-5页
英文摘要第5-7页
英文缩写索引第11-12页
1 绪论第12-22页
    1.1 问题的提出和研究意义第12-13页
        1.1.1 问题的提出第12-13页
        1.1.2 研究意义第13页
    1.2 国内外研究进展简介第13-18页
        1.2.1 微纳米拓扑结构基底的制备技术第13-15页
        1.2.2 拓扑结构基底对细胞生物学行为影响的研究概况第15-16页
        1.2.3 肺部纤维化疾病与上皮间质化过程的研究概况第16-17页
        1.2.4 拓扑结构基底影响EMT过程相关机理的研究概况第17-18页
    1.3 研究目的和研究内容第18-19页
        1.3.1 研究目的第18页
        1.3.2 研究内容第18-19页
    1.4 技术路线第19-20页
    1.5 创新点第20-22页
2 PDMS微柱阵列型拓扑结构基底的制备及其与A549细胞的复合第22-30页
    2.1 引言第22页
    2.2 实验仪器、试剂和材料第22-24页
        2.2.1 实验仪器第22-23页
        2.2.2 实验试剂和材料第23-24页
    2.3 实验方法和步骤第24-25页
        2.3.1 PDMS微柱阵列型拓扑结构基底的设计和制备第24页
        2.3.2 AFM检测不同硬度PDMS平面和微柱阵列型结构基底的杨氏模量第24-25页
        2.3.3 A549细胞培养第25页
        2.3.4 A549细胞与PDMS平面基底和微柱阵列型拓扑结构基底的复合第25页
        2.3.5 数据处理与分析第25页
    2.4 实验结果第25-28页
        2.4.1 微柱阵列型拓扑结构制作流程和相差显微镜记录微柱分布第25-27页
        2.4.2 不同硬度PDMS平面基底和微柱阵列型拓扑结构基底的杨氏模量第27页
        2.4.3 A549细胞与PDMS平面基底和微柱阵列型拓扑结构基底的复合第27-28页
    2.5 讨论和分析第28-29页
    2.6 本章小结第29-30页
3 微柱阵列型拓扑结构基底对A549细胞生物学行为的影响第30-42页
    3.1 引言第30页
    3.2 实验仪器、试剂和材料第30-33页
        3.2.1 实验仪器第30-31页
        3.2.2 试剂和材料第31-33页
    3.3 实验方法和步骤第33-37页
        3.3.1 A549细胞培养第33页
        3.3.2 扫描电镜观察细胞形态及细胞形态的量化第33页
        3.3.3 A549细胞骨架染色第33页
        3.3.4 A549细胞Vinculin免疫荧光染色第33-34页
        3.3.5 Westernblot检测Vinculin蛋白的表达第34-37页
        3.3.6 数据处理与分析第37页
    3.4 实验结果第37-40页
        3.4.1 SEM观察PDMS平面基底和微柱阵列型拓扑结构基底对A549细胞形态的影响第37-38页
        3.4.2 不同微柱阵列型结构基底对A549细胞铺展面积、细胞极化和细胞圆度的影响第38页
        3.4.3 不同微柱阵列型拓扑结构基底对A549细胞Vinculin蛋白表达的影响第38-39页
        3.4.4 不同微柱阵列型拓扑结构基底对A549细胞骨架的影响第39-40页
    3.5 讨论和分析第40-41页
    3.6 本章小结第41-42页
4 微柱阵列型拓扑结构基底对TGF-β1诱导的A549细胞EMT过程的影响及其机制初探第42-50页
    4.1 引言第42-43页
    4.2 实验仪器、试剂和材料第43-45页
        4.2.1 实验仪器第43页
        4.2.2 试剂和材料第43-45页
    4.3 实验方法和步骤第45-46页
        4.3.1 不同微柱阵列型拓扑结构基底的制备第45页
        4.3.2 A549人肺泡上皮细胞的培养第45页
        4.3.3 A549细胞与PDMS微柱阵列型结构基底的复合培养第45页
        4.3.4 TGF-β1诱导的A549细胞EMT模型的构建第45页
        4.3.5 Westernblot第45页
        4.3.6 数据处理与分析第45-46页
    4.4 实验结果第46-48页
        4.4.1 成功建立TGF-β1诱导的EMT模型第46页
        4.4.2 微柱阵列型拓扑结构基底对EMT过程的影响第46-47页
        4.4.3 微柱阵列型拓扑结构基底促进EMT过程与Smad信号通路的关系第47-48页
    4.5 讨论和分析第48-49页
    4.6 本章小结第49-50页
5 FAK在微柱阵列型拓扑结构基底促进的EMT过程中的调控作用第50-62页
    5.1 引言第50页
    5.2 实验仪器、试剂和材料第50-52页
        5.2.1 实验仪器第50-51页
        5.2.2 试剂和材料第51-52页
    5.3 实验方法和步骤第52-55页
        5.3.1 Westernblot检测不同微柱阵列型拓扑结构基底下FAK、p-FAK蛋白的表达第52页
        5.3.2 构建FAKshRNA重组载体第52-54页
        5.3.3 质粒瞬时转染第54页
        5.3.4 构建稳定表达FAK-shRNA的A549细胞株第54-55页
        5.3.5 数据处理与分析第55页
    5.4 实验结果第55-60页
        5.4.1 不同微柱阵列型结构基底对A549细胞FAK蛋白表达的影响第55-56页
        5.4.2 重组质粒 pLKO.1-FAK -sh RNA第56-58页
        5.4.3 构建shRNA稳定沉默FAK基因的A549细胞株第58页
        5.4.4 沉默FAK对A549细胞形态的影响第58-59页
        5.4.5 shRNA稳定沉默FAK基因对微柱阵列型拓扑结构基底促进的EMT过程的影响第59-60页
    5.5 讨论和分析第60页
    5.6 本章小结第60-62页
6 结论与展望第62-64页
    6.1 主要结论第62-63页
    6.2 后续工作展望第63-64页
致谢第64-66页
参考文献第66-76页
附录第76页
    A.作者在攻读硕士学位期间发表的论文第76页
    B.作者在攻读硕士学位期间参加的科研项目情况第76页

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