| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 中英文缩略词汇表 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-24页 |
| 1.1 红系发育及调控 | 第15-16页 |
| 1.1.1 红细胞生成 | 第15-16页 |
| 1.1.2 红系发育调控 | 第16页 |
| 1.2 PIM2研究进展 | 第16-22页 |
| 1.2.1 PIM激酶家族 | 第16-17页 |
| 1.2.2 PIM2调节的信号通路 | 第17-21页 |
| 1.2.3 PIM2和造血系统肿瘤 | 第21-22页 |
| 1.3 研究目的与意义 | 第22-24页 |
| 第二章 载体的构建、鉴定和慢病毒的包装 | 第24-40页 |
| 前言 | 第24-26页 |
| 技术路线 | 第26页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第26-36页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第26-30页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第30-36页 |
| 2.2 实验结果 | 第36-38页 |
| 2.2.1 完成pLKO PIM2 shRNA载体的构建 | 第36-38页 |
| 2.2.2 两条PIM2-shRNA稳定转染293T细胞 | 第38页 |
| 2.3 讨论 | 第38-39页 |
| 2.4 小结 | 第39-40页 |
| 第三章 PIM2对人红系发育的影响及其功能研究 | 第40-68页 |
| 前言 | 第40-42页 |
| 技术路线 | 第42页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第42-45页 |
| 3.1.1 主要材料与试剂 | 第42-43页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第43-44页 |
| 3.1.3 脐带血来源 | 第44页 |
| 3.1.4 主要溶液的配制 | 第44页 |
| 3.1.5 引物 | 第44-45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-52页 |
| 3.2.1 CD34~+细胞的分离 | 第45-46页 |
| 3.2.2 T淋巴细胞的培养 | 第46页 |
| 3.2.3 单核细胞的培养 | 第46页 |
| 3.2.4 巨噬细胞的培养 | 第46页 |
| 3.2.5 粒细胞的培养 | 第46-47页 |
| 3.2.6 转染CD34~+造血干细胞并检测敲低效率 | 第47页 |
| 3.2.7 细胞计数 | 第47页 |
| 3.2.8 CD34~+细胞的体外培养 | 第47-48页 |
| 3.2.9 流式细胞检测 | 第48-50页 |
| 3.2.10 Western Blot | 第50-52页 |
| 3.2.11 统计学分析 | 第52页 |
| 3.3 结果与分析 | 第52-64页 |
| 3.3.1 PIM2在红系发育过程中表达逐渐升高,且高于多种其他细胞类型 | 第52-54页 |
| 3.3.2 磁珠分选出CD34~+造血干细胞,并测定CD34~+造血干细胞纯度 | 第54页 |
| 3.3.3 红系干祖细胞阶段敲低PIM2表达 | 第54-56页 |
| 3.3.4 敲低PIM2对红系祖细胞的分化没有影响 | 第56页 |
| 3.3.5 敲低PIM2对红系祖细胞的增殖没有影响 | 第56-57页 |
| 3.3.6 敲低PIM2对红系祖细胞的凋亡没有影响 | 第57-58页 |
| 3.3.7 敲低PIM2延迟终末阶段红细胞分化 | 第58-59页 |
| 3.3.8 红细胞形态学的变化 | 第59-60页 |
| 3.3.9 敲低PIM2抑制终末阶段红细胞增殖以及细胞周期 | 第60-61页 |
| 3.3.10 敲低PIM2增加终末阶段红细胞凋亡 | 第61-62页 |
| 3.3.11 敲低PIM2降低终末阶段红细胞脱核 | 第62-63页 |
| 3.3.12 PIM2敲低激活P53 信号通路 | 第63-64页 |
| 3.4 讨论 | 第64-66页 |
| 3.5 小结 | 第66-68页 |
| 第四章 PIM2敲低对K562、HEL以及TF1细胞株向红系分化的影响 | 第68-78页 |
| 前言 | 第68-69页 |
| 技术路线 | 第69-71页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第71-72页 |
| 4.1.1 主要材料与试剂 | 第71页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第71页 |
| 4.1.3 细胞株 | 第71页 |
| 4.1.4 常用试剂配置 | 第71页 |
| 4.1.5 引物 | 第71-72页 |
| 4.2 实验方法 | 第72-73页 |
| 4.2.1 慢病毒感染K562、HEL以及TF1细胞 | 第72页 |
| 4.2.2 Hemin诱导K562、HEL和TF1细胞向红系分化 | 第72页 |
| 4.2.3 细胞增殖的检测 | 第72页 |
| 4.2.4 K562、HEL和TF1细胞向红系分化的检测 | 第72-73页 |
| 4.2.5 细胞凋亡的检测 | 第73页 |
| 4.2.6 统计学分析 | 第73页 |
| 4.3 结果与分析 | 第73-77页 |
| 4.3.1 获得PIM2稳定敲低的K562、HEL和 TF1 稳定的细胞株 | 第73-74页 |
| 4.3.2 敲低PIM2对K562、HEL和 TF1 细胞增殖没有影响 | 第74-75页 |
| 4.3.3 敲低PIM2对K562 向红系分化没有影响,抑制了HEL细胞的分化,促进了TF1细胞的分化 | 第75-76页 |
| 4.3.4 敲低PIM2对K562、HEL和 TF1 细胞凋亡无影响 | 第76-77页 |
| 4.4 讨论 | 第77页 |
| 4.5 小结 | 第77-78页 |
| 第五章 全文讨论 | 第78-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
