| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 第一章 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 Ras超家族蛋白 | 第12-13页 |
| 1.2 Rab蛋白家族背景 | 第13-17页 |
| 1.2.1 Rab蛋白的结构 | 第14-15页 |
| 1.2.2 Rab蛋白的GDP/GTP循环机制 | 第15-17页 |
| 1.2.3 Rab蛋白的功能 | 第17页 |
| 1.3 囊泡运输 | 第17-20页 |
| 1.3.1 Rab蛋白调节囊泡运输 | 第19-20页 |
| 1.4 VSVG与CTSD的简介 | 第20-21页 |
| 1.5 Rab19的研究现状 | 第21-22页 |
| 1.6 立题依据与研究思路 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-45页 |
| 2.1 材料 | 第23-30页 |
| 2.1.1 实验菌株、细胞、文库、质粒和引物 | 第23-25页 |
| 2.1.2 主要实验仪器与设备 | 第25-27页 |
| 2.1.3 主要试剂与药品 | 第27-29页 |
| 2.1.4 常用溶液 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-45页 |
| 2.2.1 常用表达载体的构建 | 第30-35页 |
| 2.2.2 RNAi真核细胞表达载体的构建 | 第35页 |
| 2.2.3 原核蛋白的表达以及纯化 | 第35-37页 |
| 2.2.4 细胞培养 | 第37-40页 |
| 2.2.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第40页 |
| 2.2.6 Western Blot免疫印迹 | 第40-41页 |
| 2.2.7 免疫荧光 | 第41-42页 |
| 2.2.8 GST-Pulldown | 第42-43页 |
| 2.2.9 细胞RNA的提取 | 第43-44页 |
| 2.2.10 检测胞内和胞外分泌的CTSD | 第44-45页 |
| 第三章 实验结果 | 第45-71页 |
| 3.1 Rab19相关载体的构建 | 第45-52页 |
| 3.1.1 pEGFP-C1-Rab19 WT质粒的构建 | 第45-46页 |
| 3.1.2 pEGFP-C1-Rab19 T31N和Q76L质粒的构建 | 第46-47页 |
| 3.1.3 pEGFP-C1-Rab19真核表达载体的表达鉴定 | 第47-49页 |
| 3.1.4 Rab19shRNA载体的构建 | 第49-51页 |
| 3.1.5 Rab19原核表达载体构建和鉴定 | 第51-52页 |
| 3.2 Rab19组织表达谱分析 | 第52-54页 |
| 3.3 Rab19的亚细胞定位 | 第54-59页 |
| 3.3.1 Rab19是一个高尔基体相关蛋白 | 第54-56页 |
| 3.3.2 Rab19与内体溶酶体标记蛋白没有共定位现象 | 第56-57页 |
| 3.3.3 Rab19与Rab43共定位明显 | 第57-59页 |
| 3.4 Rab19的功能 | 第59-67页 |
| 3.4.1 过表达Rab19对高尔基体的形态没有影响 | 第60-61页 |
| 3.4.2 Knockdown Rab19导致GM130片段化 | 第61页 |
| 3.4.3 Rab19对ER到PM的正向蛋白转运途径影响显著 | 第61-65页 |
| 3.4.4 免疫印迹检测Rab19对内源的CTSD的量没有影响 | 第65-67页 |
| 3.5 Rab19与相互作用蛋白 | 第67-71页 |
| 第四章 讨论 | 第71-75页 |
| 4.1 成功构建Rab19表达载体 | 第71-72页 |
| 4.2 确定了Rab19的定位与组织表达情况 | 第72页 |
| 4.3 Rab19的对高尔基体的形态并无显著影响 | 第72-73页 |
| 4.4 Rab19影响VSVG的正向转运途径 | 第73页 |
| 4.5 Rab19对CTSD分泌的影响不显著 | 第73页 |
| 4.6 总结 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
