| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 英文缩略词表 | 第12-14页 |
| 绪论 | 第14-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-29页 |
| 第一章 日本乙型脑炎病毒研究进展 | 第15-23页 |
| 1 乙脑病毒的分子生物学特征 | 第15-18页 |
| 1.1 乙脑病毒的形态和基因结构 | 第15页 |
| 1.2 乙脑病毒编码的蛋白 | 第15-17页 |
| 1.3 乙脑病毒的流行病学特征 | 第17-18页 |
| 2 乙脑疫苗的研究进展 | 第18-23页 |
| 2.1 鼠脑灭活疫苗 | 第18页 |
| 2.2 原代地鼠肾细胞灭活疫苗 | 第18-19页 |
| 2.3 Vero细胞纯化灭活疫苗 | 第19页 |
| 2.4 原代地鼠肾细胞减毒活疫苗 | 第19页 |
| 2.5 亚单位疫苗 | 第19-20页 |
| 2.6 核酸疫苗 | 第20页 |
| 2.7 活载体疫苗 | 第20-23页 |
| 第二章 免疫佐剂研究进展 | 第23-29页 |
| 1 递送型佐剂 | 第23-24页 |
| 1.1 盐类佐剂 | 第23-24页 |
| 1.2 油乳型佐剂 | 第24页 |
| 2 增强型佐剂 | 第24-29页 |
| 2.1 微生物及其代谢产物 | 第24-26页 |
| 2.2 化学合成类佐剂 | 第26-29页 |
| 第二部分 试验研究 | 第29-63页 |
| 第三章 建立JEV、ISG15、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10和β-actin基因Real Time PCR检测方法 | 第29-43页 |
| 1 材料与方法 | 第30-37页 |
| 1.1 毒株、菌株 | 第30页 |
| 1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 1.3 主要仪器 | 第30-31页 |
| 1.4 引物的设计与合成 | 第31页 |
| 1.5 猪外周血淋巴细胞(PBMCs)分离 | 第31-32页 |
| 1.6 PBMCs细胞刺激与细胞和病毒RNA的提取 | 第32页 |
| 1.7 JEV PreM基因阳性标准质粒构建 | 第32-36页 |
| 1.8 Real Time PCR检测方法建立 | 第36-37页 |
| 2 结果 | 第37-42页 |
| 2.1 JEV PreM基因扩增 | 第37页 |
| 2.2 重组质粒双酶切鉴定 | 第37-38页 |
| 2.3 质粒拷贝浓度计算 | 第38页 |
| 2.4 反应条件的优化 | 第38-42页 |
| 3 讨论 | 第42-43页 |
| 第四章 过表达和干扰ISG15对JEV体外增殖的影响 | 第43-55页 |
| 1 材料与方法 | 第44-49页 |
| 1.1 毒株、细胞株、菌株和质粒 | 第44页 |
| 1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 1.3 主要仪器 | 第44页 |
| 1.4 引物合成与设计 | 第44-45页 |
| 1.5 猪源ISG15基因的扩增及重组真核表达质粒的构建 | 第45-46页 |
| 1.6 ISG15基因干扰质粒构建 | 第46-47页 |
| 1.7 IFN-α和JEV对ISG15表达的影响 | 第47-48页 |
| 1.8 ISG15过表达对JEV复制影响 | 第48页 |
| 1.9 ISG15靶向干扰对JEV复制影响 | 第48页 |
| 1.10 病毒滴度检测 | 第48-49页 |
| 1.11 间接免疫荧光检测病毒感染荧光灶 | 第49页 |
| 2 结果 | 第49-53页 |
| 2.1 IFN-α和JEV对ISG15表达的影响 | 第49-50页 |
| 2.2 ISG15基因扩增,并构建重组质粒pcDNA-ISG15 | 第50-51页 |
| 2.3 ISG15基因干扰质粒双酶切鉴定 | 第51页 |
| 2.4 ISG15过表达抑制JEV复制 | 第51-52页 |
| 2.5 ISG15靶向干扰后提高JEV复制 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 第五章 不同免疫增强剂对仔猪JEV灭活疫苗免疫效果的影响和ISG15的mRNA相对表达量变化 | 第55-63页 |
| 1 材料 | 第56-59页 |
| 1.1 毒株、细胞株和试验动物 | 第56页 |
| 1.2 主要试剂 | 第56页 |
| 1.3 主要仪器 | 第56页 |
| 1.4 JEV病毒的增殖及TCID50的测定 | 第56-57页 |
| 1.5 疫苗的制备 | 第57页 |
| 1.6 试验分组和免疫程序 | 第57页 |
| 1.7 仔猪免疫水平检测 | 第57-59页 |
| 2 结果 | 第59-61页 |
| 2.1 病毒培养及滴度测定 | 第59页 |
| 2.2 中和抗体水平检测 | 第59页 |
| 2.3 淋巴细胞增殖试验 | 第59-60页 |
| 2.4 细胞因子检测 | 第60-61页 |
| 3 讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-73页 |
| 结论 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
