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TALENs与CRISPR/Cas9介导的大豆基因定点编辑及黄绿叶基因cd1的图位克隆和功能分析

摘要第11-14页
ABSTRACT第14-17页
缩略词表第18-19页
第一章 文献综述第19-51页
    1 基因组定点编辑技术的研究进展第19-37页
        1.1 归巢核酸内切酶第21-22页
        1.2 锌指核酸酶第22-24页
        1.3 转录激活样效应因子核酸酶第24-28页
        1.4 Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)9技术第28-37页
    2 大豆功能基因组学研究进展第37-41页
        2.1 正向遗传学——表型到基因第38-39页
        2.2 反向遗传学——基因到表型第39页
        2.3 关联分析与连锁分析在大豆数量性状QTL相关基因挖掘中的作用第39-41页
    3 叶绿素的生物合成、降解代谢及其调控与植物叶色突变的研究进展第41-49页
        3.1 叶绿素的生物合成、降解代谢及其调控第41-46页
        3.2 植物叶色突变体的研究进展第46-49页
    4 本研究目的及意义第49-51页
第二章 TALENs与CRISPR/Cas9介导的大豆基因组定点编辑第51-91页
    1 材料与方法第53-65页
        1.1 植物材料、实验菌株和载体第53页
        1.2 主要实验试剂及仪器第53-55页
        1.3 RNA的提取及RT-PCR实验第55页
        1.4 基因打靶位点的设计第55页
        1.5 大豆U3/U6snRNA的鉴定及序列比对第55-56页
        1.6 TALENs质粒的组装第56-57页
        1.7 CRISPR/Cas9质粒构建第57-60页
        1.8 大豆毛状根的诱导第60页
        1.9 根癌农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化第60-62页
        1.10 毛状根DNA的提取与子叶节转化外植体的试纸条检测、DNA提取第62-63页
        1.11 打靶位点的突变检测第63-65页
    2 结果与分析第65-84页
        2.1 打靶基因的选择与打靶位点的设计第65-68页
        2.2 大豆基因组U3/U6snRNA的鉴定与分析第68-70页
        2.3 TALENs质粒的组装与CRISPR/Cas9质粒构建第70-74页
        2.4 大豆毛状根的诱导与DNA的提取第74-76页
        2.5 大豆毛状根DNA的突变位点检测及打靶效率的评价第76-82页
        2.6 D7载体通过子叶节遗传转化方法转化大豆第82-84页
    3 讨论第84-91页
第三章 大豆黄绿叶基因cd1的图位克隆和功能分析第91-123页
    1 材料与方法第93-102页
        1.1 植物材料、实验菌株和载体第93页
        1.2 主要实验试剂及仪器第93-94页
        1.3 定位群体的构建第94页
        1.4 突变体cd1与对照材料(南农86-4)色素含量及抗氧化酶活的测定第94-95页
        1.5 突变基因cd1的精细定位第95页
        1.6 多序列的比对和分子进化树的构建第95-96页
        1.7 亚细胞定位第96页
        1.8 Gmcd1与CHLI1b的ATPase酶活性的测定第96-97页
        1.9 GmCHLI1b基因的敲除第97页
        1.10 酵母双杂交实验第97-99页
        1.11 烟草BiFC第99-100页
        1.12 叶绿素生物合成途径的转录组分析第100页
        1.13 RNA的提取与RT-PCR第100-102页
    2 结果与分析第102-119页
        2.1 cd1基因的精细定位第102-104页
        2.2 GmCHLIs的序列比对与结构分析第104-107页
        2.3 GmCHLIs的亚细胞定位第107-109页
        2.4 叶绿素合成途径的转录组分析第109-111页
        2.5 突变体叶片中活性氧物质积累情况第111-112页
        2.6 GmCHLI1b基因的敲除研究第112-113页
        2.7 GmCHLI1b与其相关蛋白在酵母双杂交系统中的互作关系第113-115页
        2.8 GmCHLI1b与GmTrxF1/2和GmNTRC1/2在BiFC中的互作关系第115-117页
        2.9 突变体cd1中作光合作用相关基因的表达情况第117-119页
    3 讨论第119-123页
全文结论第123-125页
本研究创新之处第125-127页
参考文献第127-147页
附录第147-159页
攻读博士学位期间发表的论文第159-161页
致谢第161页

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