| 摘要 | 第11-14页 |
| ABSTRACT | 第14-17页 |
| 缩略词表 | 第18-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-51页 |
| 1 基因组定点编辑技术的研究进展 | 第19-37页 |
| 1.1 归巢核酸内切酶 | 第21-22页 |
| 1.2 锌指核酸酶 | 第22-24页 |
| 1.3 转录激活样效应因子核酸酶 | 第24-28页 |
| 1.4 Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)9技术 | 第28-37页 |
| 2 大豆功能基因组学研究进展 | 第37-41页 |
| 2.1 正向遗传学——表型到基因 | 第38-39页 |
| 2.2 反向遗传学——基因到表型 | 第39页 |
| 2.3 关联分析与连锁分析在大豆数量性状QTL相关基因挖掘中的作用 | 第39-41页 |
| 3 叶绿素的生物合成、降解代谢及其调控与植物叶色突变的研究进展 | 第41-49页 |
| 3.1 叶绿素的生物合成、降解代谢及其调控 | 第41-46页 |
| 3.2 植物叶色突变体的研究进展 | 第46-49页 |
| 4 本研究目的及意义 | 第49-51页 |
| 第二章 TALENs与CRISPR/Cas9介导的大豆基因组定点编辑 | 第51-91页 |
| 1 材料与方法 | 第53-65页 |
| 1.1 植物材料、实验菌株和载体 | 第53页 |
| 1.2 主要实验试剂及仪器 | 第53-55页 |
| 1.3 RNA的提取及RT-PCR实验 | 第55页 |
| 1.4 基因打靶位点的设计 | 第55页 |
| 1.5 大豆U3/U6snRNA的鉴定及序列比对 | 第55-56页 |
| 1.6 TALENs质粒的组装 | 第56-57页 |
| 1.7 CRISPR/Cas9质粒构建 | 第57-60页 |
| 1.8 大豆毛状根的诱导 | 第60页 |
| 1.9 根癌农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化 | 第60-62页 |
| 1.10 毛状根DNA的提取与子叶节转化外植体的试纸条检测、DNA提取 | 第62-63页 |
| 1.11 打靶位点的突变检测 | 第63-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-84页 |
| 2.1 打靶基因的选择与打靶位点的设计 | 第65-68页 |
| 2.2 大豆基因组U3/U6snRNA的鉴定与分析 | 第68-70页 |
| 2.3 TALENs质粒的组装与CRISPR/Cas9质粒构建 | 第70-74页 |
| 2.4 大豆毛状根的诱导与DNA的提取 | 第74-76页 |
| 2.5 大豆毛状根DNA的突变位点检测及打靶效率的评价 | 第76-82页 |
| 2.6 D7载体通过子叶节遗传转化方法转化大豆 | 第82-84页 |
| 3 讨论 | 第84-91页 |
| 第三章 大豆黄绿叶基因cd1的图位克隆和功能分析 | 第91-123页 |
| 1 材料与方法 | 第93-102页 |
| 1.1 植物材料、实验菌株和载体 | 第93页 |
| 1.2 主要实验试剂及仪器 | 第93-94页 |
| 1.3 定位群体的构建 | 第94页 |
| 1.4 突变体cd1与对照材料(南农86-4)色素含量及抗氧化酶活的测定 | 第94-95页 |
| 1.5 突变基因cd1的精细定位 | 第95页 |
| 1.6 多序列的比对和分子进化树的构建 | 第95-96页 |
| 1.7 亚细胞定位 | 第96页 |
| 1.8 Gmcd1与CHLI1b的ATPase酶活性的测定 | 第96-97页 |
| 1.9 GmCHLI1b基因的敲除 | 第97页 |
| 1.10 酵母双杂交实验 | 第97-99页 |
| 1.11 烟草BiFC | 第99-100页 |
| 1.12 叶绿素生物合成途径的转录组分析 | 第100页 |
| 1.13 RNA的提取与RT-PCR | 第100-102页 |
| 2 结果与分析 | 第102-119页 |
| 2.1 cd1基因的精细定位 | 第102-104页 |
| 2.2 GmCHLIs的序列比对与结构分析 | 第104-107页 |
| 2.3 GmCHLIs的亚细胞定位 | 第107-109页 |
| 2.4 叶绿素合成途径的转录组分析 | 第109-111页 |
| 2.5 突变体叶片中活性氧物质积累情况 | 第111-112页 |
| 2.6 GmCHLI1b基因的敲除研究 | 第112-113页 |
| 2.7 GmCHLI1b与其相关蛋白在酵母双杂交系统中的互作关系 | 第113-115页 |
| 2.8 GmCHLI1b与GmTrxF1/2和GmNTRC1/2在BiFC中的互作关系 | 第115-117页 |
| 2.9 突变体cd1中作光合作用相关基因的表达情况 | 第117-119页 |
| 3 讨论 | 第119-123页 |
| 全文结论 | 第123-125页 |
| 本研究创新之处 | 第125-127页 |
| 参考文献 | 第127-147页 |
| 附录 | 第147-159页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第159-161页 |
| 致谢 | 第161页 |
