| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 第一章 绪论 | 第12-35页 |
| 1. 雌激素与乳腺癌 | 第12-21页 |
| 1.1 癌症的起因、危害和治疗方案 | 第12-14页 |
| 1.2 雌激素的生物活性及其生理作用 | 第14-16页 |
| 1.3 雌激素受体和经典的核受体信号通路途径 | 第16-17页 |
| 1.4 雌激素受体和非经典的快速信号通路途径 | 第17-20页 |
| 1.5 雌激素与ER阴性的乳腺癌 | 第20-21页 |
| 2. ER-α36与三阴性乳腺癌 | 第21-27页 |
| 2.1 雌激素受体α受体36 (ER-α36)的基因结构、表达以及功能 | 第21-24页 |
| 2.2 ER-α36在乳腺癌干样细胞中的作用 | 第24页 |
| 2.3 ER-α36-EGFR正反馈调节在三阴乳腺癌细胞中的作用 | 第24-25页 |
| 2.4 ER-α36/EGFR正反馈调节——三阴性乳腺癌治疗的新靶点 | 第25-27页 |
| 3. 阿克拉定及其相关化合物的抗肿瘤研究现状 | 第27-34页 |
| 3.1 淫羊藿植物的介绍及其传统运用 | 第27页 |
| 3.2 淫羊藿的主要成分 | 第27-28页 |
| 3.3 阿可拉定的抗癌特性 | 第28-34页 |
| 3.3.1 凋亡诱导 | 第28-29页 |
| 3.3.2 细胞周期调控 | 第29-30页 |
| 3.3.3 血管生成的抑制 | 第30-31页 |
| 3.3.4 细胞转移的抑制 | 第31-32页 |
| 3.3.5 抑制激素依赖性的癌症 | 第32页 |
| 3.3.6 肿瘤干样细胞的生长抑制 | 第32-33页 |
| 3.3.7 耐药癌细胞的抑制生长 | 第33-34页 |
| 3.3.8 免疫调节 | 第34页 |
| 4. 本研究的研究目的和意义 | 第34-35页 |
| 第二章 材料与方法 | 第35-62页 |
| 1 实验材料 | 第35-44页 |
| 1.1 细胞系 | 第35页 |
| 1.2 质粒 | 第35页 |
| 1.3 药物 | 第35页 |
| 1.4 试剂 | 第35-36页 |
| 1.5 抗体 | 第36页 |
| 1.6 试剂盒 | 第36-37页 |
| 1.7 引物 | 第37页 |
| 1.8 溶液 | 第37-43页 |
| 1.9 仪器 | 第43-44页 |
| 2 实验方法 | 第44-62页 |
| 2.1 细胞系培养 | 第44-46页 |
| 2.2 细胞计数法检测细胞增殖 | 第46页 |
| 2.3 平板克隆形成实验 | 第46-47页 |
| 2.4 软琼脂克隆形成实验 | 第47-48页 |
| 2.5 Hoechst 33258染色 | 第48页 |
| 2.6 流式细胞术检测细胞周期(DAPI染色) | 第48-49页 |
| 2.7 流式细胞术检测线细胞凋亡(PI/FITC双染) | 第49-50页 |
| 2.8 蛋白质印迹(Western blot) | 第50-52页 |
| 2.9 总RNA的提取与cDNA的合成 | 第52-54页 |
| 2.10 实时荧光定量PCR | 第54-55页 |
| 2.11 Caspase-3酶活检测 | 第55-56页 |
| 2.12 瞬时转染降低蛋白表达实验 | 第56-58页 |
| 2.13 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第58-60页 |
| 2.14 流式细胞术检测干细胞样细胞(CD24/CD44染色) | 第60页 |
| 2.15 数据处理 | 第60-62页 |
| 第三章 实验结果 | 第62-86页 |
| 1. 阿可拉定对三阴性乳腺癌细胞中EGFR和ER-α36蛋白表达的影响 | 第62-65页 |
| 1.1 阿可拉定浓度依赖性的下调EGFR和ER-α36蛋白表达 | 第62-63页 |
| 1.2 阿可拉定时间依赖性的下调EGFR和ER-α36蛋白表达 | 第63-64页 |
| 1.3 ICI 182780对EGFR和ER-α36蛋白表达的影响 | 第64-65页 |
| 2. 阿可拉定可抑制三阴性乳腺癌细胞生长 | 第65-68页 |
| 2.1 阿可拉定处理减少三阴性乳腺癌细胞的数量 | 第65-66页 |
| 2.2 阿可拉定减少三阴性乳腺癌细胞平板克隆集落的数量 | 第66-67页 |
| 2.3 阿可拉定抑制三阴性乳腺癌细胞锚定非依赖性生长(Anchorage-independentGrowth) | 第67-68页 |
| 3. 阿可拉定抑制三阴性乳腺癌细胞生长的机制 | 第68-73页 |
| 3.1 阿可拉定对三阴性乳腺癌细胞的细胞周期无影响 | 第68-69页 |
| 3.2 阿可拉定增强三阴性乳腺癌细胞的凋亡 | 第69-71页 |
| 3.3 阿可拉定诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的分子机制 | 第71-73页 |
| 4. 阿可拉定对由雌激素诱导的三阴性乳腺癌细胞生长的影响 | 第73-83页 |
| 4.1 阿可拉定抑制雌激素诱导的三阴性乳腺癌细胞的细胞周期的进展 | 第73-74页 |
| 4.2 阿可拉定抑制雌激素激活的MAPK/ ERK信号通路 | 第74-76页 |
| 4.3 E_2通过ER-α36激活MAPK/ ERK信号通路 | 第76页 |
| 4.4 计算机模拟检测阿可拉定、E_2与ER-α36受体结合能力 | 第76-78页 |
| 4.5 阿可拉定抑制雌激素刺激的细胞周期蛋白cyclin D1表达的分子机制 | 第78-83页 |
| 4.5.1 阿可拉定逆转由E2诱导的细胞周期蛋白Cyclin D1的上调 | 第78-79页 |
| 4.5.2 阿可拉定逆转由雌激素招募的转录因子c-Jun结合到Cyclin D1基因启动子区AP-1结合位点 | 第79-82页 |
| 4.5.3 ER-α36参与雌激素招募的转录因子c-Jun结合到Cyclin D1基因启动子区AP-1位点 | 第82-83页 |
| 5. 阿可拉定降低三阴性乳腺癌细胞中干样细胞的比例 | 第83-84页 |
| 6. 小结 | 第84-86页 |
| 第四章 讨论及展望 | 第86-91页 |
| 参考文献 | 第91-103页 |
| 博士期间发表的论文 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
