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积雪草酸衍生物的合成、抗肿瘤活性及机制研究

摘要第3-5页
Abstract第5-7页
第一章 绪论第13-30页
    1.1 积雪草酸及其衍生物的生物活性及构效关系第13-20页
        1.1.1 积雪草酸及其衍生物的结构第13-16页
        1.1.2 积雪草酸及其衍生物的生物活性第16-20页
        1.1.3 积雪草酸及其衍生物的构效关系第20页
    1.2 STAT3的结构与功能第20-24页
        1.2.1 STAT蛋白家族第20-22页
        1.2.2 STAT3的结构第22-23页
        1.2.3 STAT3在肿瘤研究中的作用第23-24页
        1.2.4 STAT3在五环三萜类化合物抗肿瘤活性中的作用第24页
    1.3 斑马鱼模型及其应用第24-29页
        1.3.1 斑马鱼作为模式动物的优点第24-26页
        1.3.2 斑马鱼在生物医学中的应用第26-27页
        1.3.3 构建斑马鱼体内肿瘤模型第27-29页
    1.4 技术路线第29-30页
第二章 积雪草酸衍生物的合成第30-44页
    2.1 引言第30-31页
    2.2 材料和仪器第31页
        2.2.1 材料第31页
        2.2.2 仪器第31页
    2.3 积雪草酸的提取、分离和纯化第31-33页
        2.3.1 HPLC方法学第31-32页
        2.3.2 提取、分离与纯化第32页
        2.3.3 样品分析第32-33页
    2.4 积雪草酸衍生物的合成方法及流程第33-35页
        2.4.1 乙酰化保护第34页
        2.4.2 酰氯的制备第34页
        2.4.3 氨基酸甲酯的引入第34页
        2.4.4 脱保护第34-35页
    2.5 积雪草酸衍生物的结构确证第35-36页
        2.5.1 熔点测定第35页
        2.5.2 红外分析第35页
        2.5.3 核磁共振分析第35页
        2.5.4 质谱分析第35-36页
    2.6 结果与讨论第36-42页
    2.7 小结第42-44页
第三章 积雪草酸衍生物的活性筛选第44-52页
    3.1 引言第44页
    3.2 实验材料第44-45页
        3.2.1 药品与试剂第44-45页
        3.2.2 仪器第45页
        3.2.3 主要试剂配制第45页
    3.3 实验方法第45-47页
        3.3.1 细胞培养第45-46页
        3.3.2 CCK-8检测肿瘤细胞存活率第46页
        3.3.3 利用flk1-eGFP转基因斑马鱼观察血管生成情况第46页
        3.3.4 血管生成定量检测(EAP)第46-47页
        3.3.5 数据处理和分析第47页
    3.4 实验结果第47-50页
        3.4.1 积雪草酸及其衍生物的抗肿瘤活性比较第47-49页
        3.4.2 积雪草酸及其衍生物对斑马鱼血管生成作用的筛选第49-50页
    3.5 讨论第50-51页
    3.6 小结第51-52页
第四章 AA-PMe对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的作用及机制第52-98页
    4.1 引言第52-55页
    4.2 实验材料第55-57页
        4.2.1 药品与试剂第55-56页
        4.2.2 实验细胞第56页
        4.2.3 实验仪器第56页
        4.2.4 主要试剂配制第56-57页
    4.3 实验方法第57-70页
        4.3.1 细胞培养第57页
        4.3.2 pEGFP-C3/STAT3重组质粒的构建第57-61页
        4.3.3 STAT3 shRNA的构建第61-64页
        4.3.4 细胞转染第64页
        4.3.5 CCK-8测细胞存活率第64页
        4.3.6 台盼蓝检测细胞增殖第64-65页
        4.3.7 Annexin V-FITC/PI双染荧光显微镜检测细胞凋亡第65页
        4.3.8 Annexin V-FITC/PI双染流式检测细胞凋亡第65页
        4.3.9 流式细胞术PI染色检测细胞周期第65页
        4.3.10 划痕实验检测AA-PMe对胃癌细胞迁移的影响第65-66页
        4.3.11 transwell小室法检测AA-PMe对胃癌细胞侵袭的影响第66页
        4.3.12 总蛋白质提取第66-67页
        4.3.13 Western Blot检测第67-68页
        4.3.14 Realtime-PCR检测第68-69页
        4.3.15 免疫细胞化学第69页
        4.3.16 数据处理与分析第69-70页
    4.4 实验结果第70-93页
        4.4.1 AA-PMe抑制胃癌细胞增殖第70-72页
        4.4.2 AA-PMe诱导胃癌细胞凋亡第72-78页
        4.4.3 AA-PMe阻滞胃癌细胞周期的进行第78-81页
        4.4.4 AA-PMe抑制胃癌细胞的迁移和侵袭第81-85页
        4.4.5 AA-PMe对JAK-STAT通路的影响第85-93页
    4.5 讨论第93-96页
    4.6 小结第96-98页
第五章 AA-PMe对人脐静脉内皮细胞HUVEC以及斑马鱼的血管形成的作用及其机制研究第98-116页
    5.1 引言第98-99页
    5.2 实验材料第99-100页
        5.2.1 实验药品与试剂第99-100页
        5.2.2 实验仪器第100页
        5.2.3 实验动物第100页
    5.3 实验方法第100-103页
        5.3.1 细胞培养第100页
        5.3.2 细胞增殖实验第100页
        5.3.3 划痕实验第100页
        5.3.4 transwell小室实验第100页
        5.3.5 小管生成实验第100-101页
        5.3.6 血管生成定量检测第101页
        5.3.7 血管染色第101-102页
        5.3.8 利用flk1-eGFP转基因斑马鱼观察血管生成情况第102页
        5.3.9 总蛋白提取第102-103页
        5.3.10 Western Blot第103页
        5.3.11 mRNA提取第103页
        5.3.12 Realtime-PCR检测VEGFR2 mRNA的表达量第103页
        5.3.13 数据统计第103页
    5.4 实验结果第103-114页
        5.4.1 AA-PMe抑制HUVEC细胞的增殖第103-104页
        5.4.2 AA-PMe抑制VEGF刺激的HUVEC趋化运动和管状结构形成第104-107页
        5.4.3 AA-PMe改变HUVEC细胞中由VEGF诱导的VEGFR2的mRNA表达第107-108页
        5.4.4 AA-PMe抑制VEGFR2蛋白的表达以及调节VEGFR2相关通路的激活第108-109页
        5.4.5 AA-PMe抑制斑马鱼血管形成第109-113页
        5.4.6 AA-PMe抑制斑马鱼VEGFR2蛋白的表达第113页
        5.4.7 AA-PMe改变斑马鱼中由VEGF诱导的VEGFR2的mRNA表达第113-114页
    5.5 讨论第114-115页
    5.6 小结第115-116页
第六章 AA-PMe在斑马鱼中的吸收、代谢及毒性研究第116-137页
    6.1 绪言第116页
    6.2 实验材料第116-117页
        6.2.1 实验药品与试剂第116-117页
        6.2.2 仪器第117页
        6.2.3 实验生物第117页
    6.3 实验方法第117-121页
        6.3.1 胃癌细胞对AA-PMe的吸收分析第117-118页
        6.3.2 斑马鱼对AA-PMe的吸收分析第118-119页
        6.3.3 AA-PMe在斑马鱼中的代谢分析第119-120页
        6.3.4 AA-PMe对斑马鱼早期发育的毒性研究第120-121页
    6.4 实验结果第121-135页
        6.4.1 HPLC测定胃癌细胞SGC7901内外AA-PMe的浓度第121-124页
        6.4.2 HPLC测定胃癌细胞HGC27内外AA-PMe的浓度第124-127页
        6.4.3 HPLC测定斑马鱼体内及体外AA-PMe的浓度第127-130页
        6.4.4 AA-PMe在斑马鱼体内的代谢研究第130-132页
        6.4.5 AA-PMe对斑马鱼发育的毒性效应第132-135页
    6.5 讨论第135-136页
        6.5.1 AA-PMe在细胞及斑马鱼体内外的吸收第135页
        6.5.2 AA-PMe斑马鱼中的代谢第135页
        6.5.3 AA-PMe对斑马鱼的毒性评价第135-136页
    6.6 小结第136-137页
全文总结与展望第137-138页
参考文献第138-155页
中英文缩写对照表第155-157页
在读期间发表的学术论文及研究成果第157-158页
致谢第158页

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