摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-7页 |
第一章 绪论 | 第13-30页 |
1.1 积雪草酸及其衍生物的生物活性及构效关系 | 第13-20页 |
1.1.1 积雪草酸及其衍生物的结构 | 第13-16页 |
1.1.2 积雪草酸及其衍生物的生物活性 | 第16-20页 |
1.1.3 积雪草酸及其衍生物的构效关系 | 第20页 |
1.2 STAT3的结构与功能 | 第20-24页 |
1.2.1 STAT蛋白家族 | 第20-22页 |
1.2.2 STAT3的结构 | 第22-23页 |
1.2.3 STAT3在肿瘤研究中的作用 | 第23-24页 |
1.2.4 STAT3在五环三萜类化合物抗肿瘤活性中的作用 | 第24页 |
1.3 斑马鱼模型及其应用 | 第24-29页 |
1.3.1 斑马鱼作为模式动物的优点 | 第24-26页 |
1.3.2 斑马鱼在生物医学中的应用 | 第26-27页 |
1.3.3 构建斑马鱼体内肿瘤模型 | 第27-29页 |
1.4 技术路线 | 第29-30页 |
第二章 积雪草酸衍生物的合成 | 第30-44页 |
2.1 引言 | 第30-31页 |
2.2 材料和仪器 | 第31页 |
2.2.1 材料 | 第31页 |
2.2.2 仪器 | 第31页 |
2.3 积雪草酸的提取、分离和纯化 | 第31-33页 |
2.3.1 HPLC方法学 | 第31-32页 |
2.3.2 提取、分离与纯化 | 第32页 |
2.3.3 样品分析 | 第32-33页 |
2.4 积雪草酸衍生物的合成方法及流程 | 第33-35页 |
2.4.1 乙酰化保护 | 第34页 |
2.4.2 酰氯的制备 | 第34页 |
2.4.3 氨基酸甲酯的引入 | 第34页 |
2.4.4 脱保护 | 第34-35页 |
2.5 积雪草酸衍生物的结构确证 | 第35-36页 |
2.5.1 熔点测定 | 第35页 |
2.5.2 红外分析 | 第35页 |
2.5.3 核磁共振分析 | 第35页 |
2.5.4 质谱分析 | 第35-36页 |
2.6 结果与讨论 | 第36-42页 |
2.7 小结 | 第42-44页 |
第三章 积雪草酸衍生物的活性筛选 | 第44-52页 |
3.1 引言 | 第44页 |
3.2 实验材料 | 第44-45页 |
3.2.1 药品与试剂 | 第44-45页 |
3.2.2 仪器 | 第45页 |
3.2.3 主要试剂配制 | 第45页 |
3.3 实验方法 | 第45-47页 |
3.3.1 细胞培养 | 第45-46页 |
3.3.2 CCK-8检测肿瘤细胞存活率 | 第46页 |
3.3.3 利用flk1-eGFP转基因斑马鱼观察血管生成情况 | 第46页 |
3.3.4 血管生成定量检测(EAP) | 第46-47页 |
3.3.5 数据处理和分析 | 第47页 |
3.4 实验结果 | 第47-50页 |
3.4.1 积雪草酸及其衍生物的抗肿瘤活性比较 | 第47-49页 |
3.4.2 积雪草酸及其衍生物对斑马鱼血管生成作用的筛选 | 第49-50页 |
3.5 讨论 | 第50-51页 |
3.6 小结 | 第51-52页 |
第四章 AA-PMe对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的作用及机制 | 第52-98页 |
4.1 引言 | 第52-55页 |
4.2 实验材料 | 第55-57页 |
4.2.1 药品与试剂 | 第55-56页 |
4.2.2 实验细胞 | 第56页 |
4.2.3 实验仪器 | 第56页 |
4.2.4 主要试剂配制 | 第56-57页 |
4.3 实验方法 | 第57-70页 |
4.3.1 细胞培养 | 第57页 |
4.3.2 pEGFP-C3/STAT3重组质粒的构建 | 第57-61页 |
4.3.3 STAT3 shRNA的构建 | 第61-64页 |
4.3.4 细胞转染 | 第64页 |
4.3.5 CCK-8测细胞存活率 | 第64页 |
4.3.6 台盼蓝检测细胞增殖 | 第64-65页 |
4.3.7 Annexin V-FITC/PI双染荧光显微镜检测细胞凋亡 | 第65页 |
4.3.8 Annexin V-FITC/PI双染流式检测细胞凋亡 | 第65页 |
4.3.9 流式细胞术PI染色检测细胞周期 | 第65页 |
4.3.10 划痕实验检测AA-PMe对胃癌细胞迁移的影响 | 第65-66页 |
4.3.11 transwell小室法检测AA-PMe对胃癌细胞侵袭的影响 | 第66页 |
4.3.12 总蛋白质提取 | 第66-67页 |
4.3.13 Western Blot检测 | 第67-68页 |
4.3.14 Realtime-PCR检测 | 第68-69页 |
4.3.15 免疫细胞化学 | 第69页 |
4.3.16 数据处理与分析 | 第69-70页 |
4.4 实验结果 | 第70-93页 |
4.4.1 AA-PMe抑制胃癌细胞增殖 | 第70-72页 |
4.4.2 AA-PMe诱导胃癌细胞凋亡 | 第72-78页 |
4.4.3 AA-PMe阻滞胃癌细胞周期的进行 | 第78-81页 |
4.4.4 AA-PMe抑制胃癌细胞的迁移和侵袭 | 第81-85页 |
4.4.5 AA-PMe对JAK-STAT通路的影响 | 第85-93页 |
4.5 讨论 | 第93-96页 |
4.6 小结 | 第96-98页 |
第五章 AA-PMe对人脐静脉内皮细胞HUVEC以及斑马鱼的血管形成的作用及其机制研究 | 第98-116页 |
5.1 引言 | 第98-99页 |
5.2 实验材料 | 第99-100页 |
5.2.1 实验药品与试剂 | 第99-100页 |
5.2.2 实验仪器 | 第100页 |
5.2.3 实验动物 | 第100页 |
5.3 实验方法 | 第100-103页 |
5.3.1 细胞培养 | 第100页 |
5.3.2 细胞增殖实验 | 第100页 |
5.3.3 划痕实验 | 第100页 |
5.3.4 transwell小室实验 | 第100页 |
5.3.5 小管生成实验 | 第100-101页 |
5.3.6 血管生成定量检测 | 第101页 |
5.3.7 血管染色 | 第101-102页 |
5.3.8 利用flk1-eGFP转基因斑马鱼观察血管生成情况 | 第102页 |
5.3.9 总蛋白提取 | 第102-103页 |
5.3.10 Western Blot | 第103页 |
5.3.11 mRNA提取 | 第103页 |
5.3.12 Realtime-PCR检测VEGFR2 mRNA的表达量 | 第103页 |
5.3.13 数据统计 | 第103页 |
5.4 实验结果 | 第103-114页 |
5.4.1 AA-PMe抑制HUVEC细胞的增殖 | 第103-104页 |
5.4.2 AA-PMe抑制VEGF刺激的HUVEC趋化运动和管状结构形成 | 第104-107页 |
5.4.3 AA-PMe改变HUVEC细胞中由VEGF诱导的VEGFR2的mRNA表达 | 第107-108页 |
5.4.4 AA-PMe抑制VEGFR2蛋白的表达以及调节VEGFR2相关通路的激活 | 第108-109页 |
5.4.5 AA-PMe抑制斑马鱼血管形成 | 第109-113页 |
5.4.6 AA-PMe抑制斑马鱼VEGFR2蛋白的表达 | 第113页 |
5.4.7 AA-PMe改变斑马鱼中由VEGF诱导的VEGFR2的mRNA表达 | 第113-114页 |
5.5 讨论 | 第114-115页 |
5.6 小结 | 第115-116页 |
第六章 AA-PMe在斑马鱼中的吸收、代谢及毒性研究 | 第116-137页 |
6.1 绪言 | 第116页 |
6.2 实验材料 | 第116-117页 |
6.2.1 实验药品与试剂 | 第116-117页 |
6.2.2 仪器 | 第117页 |
6.2.3 实验生物 | 第117页 |
6.3 实验方法 | 第117-121页 |
6.3.1 胃癌细胞对AA-PMe的吸收分析 | 第117-118页 |
6.3.2 斑马鱼对AA-PMe的吸收分析 | 第118-119页 |
6.3.3 AA-PMe在斑马鱼中的代谢分析 | 第119-120页 |
6.3.4 AA-PMe对斑马鱼早期发育的毒性研究 | 第120-121页 |
6.4 实验结果 | 第121-135页 |
6.4.1 HPLC测定胃癌细胞SGC7901内外AA-PMe的浓度 | 第121-124页 |
6.4.2 HPLC测定胃癌细胞HGC27内外AA-PMe的浓度 | 第124-127页 |
6.4.3 HPLC测定斑马鱼体内及体外AA-PMe的浓度 | 第127-130页 |
6.4.4 AA-PMe在斑马鱼体内的代谢研究 | 第130-132页 |
6.4.5 AA-PMe对斑马鱼发育的毒性效应 | 第132-135页 |
6.5 讨论 | 第135-136页 |
6.5.1 AA-PMe在细胞及斑马鱼体内外的吸收 | 第135页 |
6.5.2 AA-PMe斑马鱼中的代谢 | 第135页 |
6.5.3 AA-PMe对斑马鱼的毒性评价 | 第135-136页 |
6.6 小结 | 第136-137页 |
全文总结与展望 | 第137-138页 |
参考文献 | 第138-155页 |
中英文缩写对照表 | 第155-157页 |
在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第157-158页 |
致谢 | 第158页 |