| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 引言 | 第6-7页 |
| 第1章 实验材料 | 第7-9页 |
| 1.1 质粒、细胞及细胞培养液 | 第7页 |
| 1.2 工具酶及纯化试剂 | 第7页 |
| 1.3 引物合成及测序 | 第7页 |
| 1.4 主要仪器 | 第7-9页 |
| 第2章 实验方法 | 第9-17页 |
| 2.1 PCR扩增目的基因mgp120 | 第9-10页 |
| 2.2 构建mgp120基因重组定向克隆转移载体 | 第10-11页 |
| 2.2.1 定向克隆 | 第10页 |
| 2.2.2 制备TOP10感受态细胞 | 第10页 |
| 2.2.3 转化TOP10感受态细胞 | 第10-11页 |
| 2.2.4 质粒的提取和纯化 | 第11页 |
| 2.2.5 PCR鉴定 | 第11页 |
| 2.2.6 测序鉴定 | 第11页 |
| 2.3 构建mgp120基因重组腺病毒表达载体 | 第11-12页 |
| 2.3.1 同源重组 | 第11-12页 |
| 2.3.2 转化TOP10感受态细胞 | 第12页 |
| 2.3.3 扩增纯化重组腺病毒DNA | 第12页 |
| 2.3.4 PCR鉴定 | 第12页 |
| 2.4 mgp120基因重组腺病毒的包装和扩增 | 第12-15页 |
| 2.4.1 HEK293A细胞的培养与传代 | 第12-13页 |
| 2.4.2 重组腺病毒DNA的线性化 | 第13页 |
| 2.4.3 提取重组腺病毒质粒DNA | 第13页 |
| 2.4.4 脂质体介导转染HEK293A细胞 | 第13-14页 |
| 2.4.5 小量收集病毒颗粒 | 第14页 |
| 2.4.6 病毒扩增 | 第14页 |
| 2.4.7 重组腺病毒的纯化 | 第14-15页 |
| 2.5 病毒滴度的测定 | 第15页 |
| 2.6 Western blot鉴定 | 第15-17页 |
| 2.6.1 Western blot的准备 | 第15页 |
| 2.6.2 SDS-PAGE电泳 | 第15-16页 |
| 2.6.3 转膜 | 第16页 |
| 2.6.4 Western杂交 | 第16-17页 |
| 第3章 结果 | 第17-19页 |
| 3.1 mgp120基因重组穿梭载体质粒的鉴定 | 第17页 |
| 3.2 mgp120基因重组腺病毒构建的鉴定 | 第17-19页 |
| 3.2.1 重组腺病毒表达载体质粒的PCR鉴定 | 第17页 |
| 3.2.2 重组腺病毒CPE的形成 | 第17-18页 |
| 3.2.3 重组腺病毒表达蛋白的Western blot鉴定 | 第18页 |
| 3.2.4 重组腺病毒滴度的测定 | 第18-19页 |
| 第4章 讨论 | 第19-21页 |
| 结论 | 第21-22页 |
| 参考文献 | 第22-24页 |
| 综述 | 第24-30页 |
| 综述参考文献 | 第28-30页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第30-31页 |
| 附录 | 第31-33页 |
| 致谢 | 第33-34页 |